SENP1在肺发育过程中的作用及其对AECⅡ分化的影响

论文摘要

目的通过检测SUMO特异性蛋白酶1（SUMO-specific proteases 1,SENP1）、小泛素样修饰蛋白（small ubiquitin-related modifier-1,SUMO1）在肺发育过程中的表达变化,明确SENP1、SUMO1参与调控肺发育,再进一步通过体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）,研究AECⅡ分化过程中SENP1表达变化,和抑制SENP1对细胞生长及分化的影响,来探讨SENP1在肺发育过程中的作用。方法实验分为两部分:第一部分,根据大鼠肺发育的不同阶段,于生后1 d、4 d、7 d、14d处死新生大鼠取肺组织,通过HE染色法观察不同时期肺的形态结构变化,用RT-qPCR、Western blot检测SUMO1和SENP1 mRNA及蛋白在肺发育不同时期的表达变化。第二部分,体外培养AECⅡ时,通过加入维甲酸（Retinoic acid,RA）促进细胞分化,并使用细胞免疫荧光法和Western bolt检测肺表面活性蛋白C（Surfactant Protein C,SP-C）、水通道蛋白5（aquaporin,AQP5）表达变化,证明RA促分化的作用;进一步在RA促进AECⅡ分化的基础上,通过siRNA转染法抑制SENP1表达,检测SP-C、AQP5及SUMO1表达变化,研究抑制SENP1对细胞分化的影响;同时通过CCK-8和流式细胞术检测抑制SENP1对AECⅡ增殖、凋亡的影响。结果（1）生后14 d内,SUMO1 mRNA稳定表达（P>0.05）,生后4 d肺组织中游离SUMO1蛋白表达较生后1 d及7 d均明显升高（P<0.05）。进一步检测不同状态SUMO1蛋白的表达发现,生后4 d、14 d,肺组织SUMO1总蛋白表达无明显变化,游离SUMO1表达减少,SUMO1结合蛋白表达增加（P<0.05）。而SENP1蛋白及mRNA表达变化与游离SUMO1变化趋势一致（P<0.05）。（2）免疫荧光及Western bolt检测RA对AECⅡ分化的影响。免疫荧光结果显示,与同时间点对照组相比较,均表现为RA组SP-C表达比例降低,AQP5表达比例升高,差异有统计学意义（P<0.05）。Western bolt结果示,与对照组相比,培养24 h和72 h时,RA组SP-C蛋白表达减少,48 h时SP-C蛋白表达增多,差异有统计学意义（P<0.05）;各时间点与对照组相比,RA组AQP5表达增多,差异有统计学意义（P<0.05）;各时间点RA组SENP1表达均较对照组增加,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）进一步在RA促分化的基础上抑制SENP1表达,与RA+si?NS组相比,SP?C蛋白在培养24 h和48 h时表达增加,差异有统计学意义（P<0.05）;各时间点RA+si-SENP1组AQP5蛋白表达均较RA+si-NS组降低,差异有统计学意义（P<0.05）;培养48 h时检测抑制SENP1对蛋白SUMO化的影响,随着SENP1表达被抑制,SUMO1结合蛋白（conjugated SUMO1）表达增多,游离SUMO1（free SUMO1）表达减少,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）利用siRNA转染抑制SENP1,发现各时间点si-SENP1组细胞增殖水平均较si-NS组降低,差异有统计学意义（P<0.05）。各时间点siRNA抑制SENP1表达后,si-SENP1组细胞凋亡率均较si-NS组升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论（1）SENP1在大鼠肺发育的过程中动态表达,且与游离SUMO1表达趋势一致,说明SENP1可能通过影响蛋白SUMO化修饰参与肺发育。（2）体外培养AECⅡ发现SENP1在细胞分化过程中表达增加,进一步验证抑制SENP1对细胞分化的影响,发现SENP1表达降低可使AECⅡ分化受抑,同时SUMO1结合蛋白表达明显增多,表明SENP1可能通过调控蛋白SUMO化修饰影响AECⅡ分化。（3）SENP1通过参与AECⅡ分化、增殖、凋亡在肺发育过程中起作用。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 万雪晴

导师: 卢红艳

关键词: 肺发育,化特异性蛋白酶,化修饰,大鼠,型肺泡上皮细胞

来源: 江苏大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 江苏大学

基金: 国家自然科学基金(81370746,81741052),江苏省自然科学基金(BK20161356)

分类号: R332.2

总页数: 62

文件大小: 2609K

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