导读:本文包含了单精注射论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:精子,胚胎,体外,细胞,囊胚,生殖细胞,染色体。
单精注射论文文献综述
曹伟东[1]（2015）在《猪卵母细胞体外成熟及单精注射制备胚胎的研究》一文中研究指出将精子载体转基因法(SMGT)与单精注射(ICSI)结合制备转基因动物是一种新的转基因技术,研究历史较短,但其可行性和高效性已在多个物种得到试验证实。随着胚胎生物技术的发展,对体外成熟卵母细胞的质量要求日益增加。目前通过体外培养获得成熟卵母细胞,其胞质成熟度还是不及体内的成熟卵母细胞,影响卵母细胞体外成熟质量的因素有体外成熟培养的时间控制、体外成熟培养液中不同添加物、卵母细胞获取方法和卵母细胞质量等等。因此需对这些环节进行优化研究,本实验为研究如何在众多的卵母细胞中挑选出合适的卵母细胞用于体外成熟培养,为了能够获得更多优质的卵母细胞。以体外成熟的猪卵母细胞为材料,对猪卵母细胞体外受精和孤雌激活等相关问题进行了初步研究,同时也探索了单精子显微注射技术制备胚胎的研究。实验内容有抽取猪卵母细胞根据卵丘细胞的层数及完整性将卵母细胞分成A、B、C叁组,并分别进行体外成熟培养,体外成熟44h观察卵母细胞第一极体的排出情况,试验结果:A、B、C叁组卵母细胞的第一极体排出率分别为(68.94%vs47.94%vs31.65%),结果表明A组卵母细胞的的第一极体排出率明显高于B、C两组,且A组和B组差异极显着(p<0.01),A组和C组pbI排出率差异极显着(p<0.0]),B组和C组pbI排出率差异极显着(p<0.01)。A、B、C叁组卵母细胞进行孤雌激活实验,在体外培养24-48h观察卵裂情况,体外培养5-6d观察囊胚情况,实验数据结果为A、B、C叁组卵母细胞培养24-48h后得到的卵裂率分别为87.72%,82.38%,52.94%。A、B组卵母细胞的卵裂率差异不显着(p>0.05),A、C组卵母细胞的卵裂率差异极显着(p<0.0]),B、C组卵母细胞差异极显着(p<0.01)。A、B、C叁组卵母细胞体外培养第5-6d的时候囊胚率分别为10.96%,6.21%,2.88%。A组卵母细胞囊胚率高于B组和C组,A组和C组差异显着(p<0.05),B组囊胚率高于C组,差异显着(p<0.05)。不同级别的成熟卵母细胞进行体外受精后,A组卵母细胞的囊胚率(10.61%)明显高于B组囊胚率(5.34%)和C组囊胚率(3.58%),A组和B组卵母细胞的囊胚率差异极显着(P<0.01),B组和C组卵母细胞的囊胚率差异不显着(P>0.05)。这一结果表明了卵丘细胞对卵母细胞体外受精受精卵胚胎的发育有影响。④进行了猪卵母细胞胞质内单精子显微注射制备胚胎的实验,并作出了改进,实验成功的制备出6枚受精卵囊胚,此试验为制备转基因猪研究奠定基础。结论:卵丘细胞对卵母细胞的体外成熟和胚胎发育有促进作用,选择3层以上包裹致密的卵丘-卵母细胞复合体体外成熟效果更好。单精子显微注射制备猪胚胎的实验成功的制备6枚受精卵囊胚。(本文来源于《南京农业大学》期刊2015-05-01）
彭旭[2]（2014）在《猪卵母细胞成熟分裂及单精注射后首次卵裂过程中Aurora-B的表达与功能》一文中研究指出脊椎动物卵母细胞成熟分裂和早期胚胎发育过程均受到多种蛋白激酶的调节。近年来对于卵母细胞成熟、激活和受精的分子机制研究取得了很多进展。Aurora激酶是广泛分布在真核生物体内的丝/苏氨酸蛋白激酶家族,有证据证明Aurora激酶在哺乳动物卵母细胞成熟和激活过程中也起着关键性的作用。在哺乳动物,已发现Aurora激酶的同源蛋白,分别为Aurora-A、-B和-C。它们具有相似的结构,即相对保守的C末端和长度多变的N末端；但这3种同源蛋白在自身表达、亚细胞定位及酶激活时间等方面都各不相同。Aurora-B是丝/苏氨酸蛋白激酶家族中的一员。由于Aurora-B激酶在许多实性肿瘤中过量表达,表现出致癌基因的作用,在癌症研究中Aurora-B常被作为治疗的重要靶点。最近的研究表明,Aurora-B在调控卵母细胞成熟分裂进程和早期胚胎发育的相关信号通路上扮演着重要角色。哺乳动物卵母细胞的成熟分裂阻滞和恢复的机制,以及受精卵早期发育过程中,尤其是首次有丝分裂由1-细胞(合子)向2-细胞转换的机制,是当前生殖和发育生物学研究的热点之一。研究Aurora-B对猪卵母细胞成熟分裂和辅助受精后首次卵裂的调控,对于认识生殖发育机理、实施生殖调控都具有重要的意义。目前,虽然在Aurora-B调控低等动物(如非洲爪蛙)卵母细胞成熟分裂进程和相关信号通路上取得了一些成果,但有关Aurora-B在哺乳类卵母细胞成熟分裂及早期胚胎发育过程中的表达定位与功能研究较少。已有的报道主要集中在小鼠受精卵和爪蛙卵母细胞上,有关猪卵母细胞成熟分裂和首次有丝分裂过程中Aurora-B mRNA或蛋白的表达规律与功能迄今未见报道。胞质内单精注射(ICSI)技术在哺乳动物上的应用十分广泛,已在诸多领域发挥出它的独特作用。应用ICSI技术体外生产胚胎,有助于准确掌握受精时程,便于观察精卵融合及重要受精事件的发生。ICSI作为实验手段已被广泛用于受精生物学研究,是开展受精基础研究的有效实验模型。本研究将ICSI操作、荧光定量PCR分析和免疫荧光染色技术相结合,检测猪卵母细胞成熟分裂和ICSI胚胎首次有丝分裂过程中Aurora-B mRNA和蛋白的动态表达及亚细胞定位；在此基础上,通过Aurora-B的特异性抑制剂AZD-1152的特异性抑制试验,分析Aurora-B对猪卵母细胞成熟和单精注射后首次卵裂进程的影响,以期为了解猪卵母细胞成熟分裂和胚胎早期发育的分子机制提供实验依据。实验结果如下：1.猪卵母细胞成熟分裂过程中Aurora-B mRNA水平的变化在猪卵母细胞成熟分裂过程中,0h(GV期)时,Aurora-B mRNA表达量最高；20 h的表达量最低；在30、36和44 h表达量虽有所升高,但仍显着低于0h组(P<0.05)。而30和44 h的Aurora-B mRNA表达水平高于20和36h组。2.猪卵母细胞成熟分裂过程中Aurora-B与α-tubulin的共定位0h GV期卵母细胞,微管未开始组装,Aurora-B均匀分布在细胞质中,未检测到其特异性存在；GVBD发生后,Aurora-B蛋白与a-tubulin集中分布于染色体附近,合成图像显示两者完全重迭；随着成熟分裂进行至MⅠ期,染色体排列在赤道板上,Aurora-B的定位也与a-tubulin重迭。MⅠ后期,Aurora-B仍定位于纺锤体上；临近MⅡ期,Aurora-B的定位则随着纺锤体位置的改变而有变化,主要定位于卵母细胞核及第一极体(pbI)。3.AZD-1152对猪卵母细胞成熟和细胞骨架的影响用Aurora-B特异性抑制剂AZD-1152处理后,阻滞在Pro MI-AI-TI期卵母细胞较对照组明显增加(P<0.05),达到MⅡ期的卵母细胞显着减少(P<0.05),同时MⅡ期卵母细胞发生染色体排列紊乱、纺锤体形态异常、微丝断裂和分散的比例增加。4.抑制猪卵母细胞Aurora-B表达对孤雌胚胎发育的影响用AZD-1152抑制猪卵母细胞Aurora-B的表达,与对照组相比,AZD-1152处理组的卵裂率、囊胚发育率和囊胚细胞总数均有显着降低,降低的程度随着所用AZD-1152浓度的增加而增加；抑制猪卵母细胞Aurora-B表达,孤雌胚胎的发育受到严重影响。5.猪ICSI胚胎首次有丝分裂进程的观察ICSI重构胚激活后18h,雌雄原核已完成融合,合子形成,受精完成。20h时,姐妹染色单体在纺锤丝的牵引作用下,向细胞两极分离。22h时,染色质已位于细胞两极,卵裂沟形成,细胞质进入分裂状态。到了24h,细胞质分裂完成,胚胎完成首次有丝分裂过程。6.猪ICSI胚胎首次卵裂过程中Aurora-B mRNA的表达随着首次有丝分裂的进行,猪ICSI胚胎激活后20、22和24 h, Aurora-B mRNA的表达均较18h组显着升高(P<0.05),且在24 h达到最高,并显着高于其它各组。22h组与20h组相比,Aurora-B mRNA表达水平有所降低,但差异不显着(P>0.05)。7.猪ICSI胚胎首次卵裂过程中Aurora-B与a-tubulin的共定位在18h时,合子处于首次有丝分裂过程,此时Aurora-B在极体附近表达较高；到了20h时,细胞处于有丝分裂后期,Aurora-B蛋白的定位与纺锤体的位置完全重合；22h时,Aurora-B的定位与染色体的位置重合；24h时,细胞分裂末期,Aurora-B依然与微管的位置重迭,其定位紧随纺锤体。8.抑制Aurora-B表达对猪单精注射胚胎首次卵裂的影响利用特异性抑制剂AZD-1152抑制Aurora-B表达,发现随着抑制剂浓度的增大,猪ICSI重构胚形成单个细胞核的几率显着增加；而对胞质分离的抑制作用也较为明显,随抑制剂浓度的增加,处理组卵裂率与对照组相比显着降低。9.抑制Aurora-B表达后猪单精注射胚胎首次卵裂过程中Aurora-B及Mad2 mRNA的变化用AZD-1152抑制Aurora-B表达后,单精注射胚胎的Aurora-B与Mad2mRNA表达水平均有不同程度下降。20和24 h处理组胚胎Aurora-B mRNA表达水平较对照组显着下降。对照组Mad2 mRNA表达水平在18、22和24h差别不大,但20h组表达水平最高；而处理组胚胎Mad2 mRNA的表达水平均较对照组降低,在20h组表达最低。(本文来源于《南京农业大学》期刊2014-04-01）
胡骁睿[3]（2014）在《单精注射制备转基因猪胚胎技术的研究》一文中研究指出转基因动物研究开始于上个世纪七十年代末,是一项能对家畜基因组进行修饰的有效技术,对改进畜牧业生产效率有重大的作用。目前转基因技术有原核注射法、精子介导法、逆转录病毒感染法和体细胞移植法等。将精子载体转基因法(SMGT)与单精注射(ICSI)结合制备转基因动物是一种新的转基因技术,研究历史较短,但其可行性和高效性已在多个物种得到试验证实。BAC作为转基因载体,可携带的基因包括上下游调控序列,可以和转录酶、转录因子等作用,转基因将能遵守基因固有的表达机制。所以将ICSI-SMGT技术与BAC转基因技术相结合制备转基因猪,为我们今后制备大片段转基因猪提供了新方法,具有广阔的应用前景。为成功制备转基因猪胚胎,本课题将从猪卵母细胞延迟保存与体外培养和以单精注射技术与BAC载体技术相结合为目标的两个方面进行研究。第一方面,建立猪卵母细胞体外延迟保存体系,拟设计先将卵母细胞分别放入TCM199(含HEPE)、PBS缓冲液(无Ca2+和Mg2+)和DMEM低糖培养基中37℃保存6-8h后转入成熟培养液与瞬时放入成熟培养液的对照组作比较,统计分析试验组之间成熟率,卵裂率和囊胚率的差别。其中对照组成熟率为78.190%,卵裂率为55.87%和囊胚率尾12.23%;TCM199试验组成熟率为76.25%,卵裂率为55.00%和囊胚率为12.12%；PBS试验组成熟率为49.00%,卵裂率为22.00%和囊胚率为2.27%；DMEM试验组成熟率为47.50%,卵裂率为20.50%和囊胚率为2.43%。比较结果发现TCM199试验组与对照组无显着差异,进而将TCM199试验组的胚胎进行胚胎移植,母猪受孕后产下11头小猪,小猪健康状况良好,体貌特征与自然受孕分娩的小猪无差异,所以TCM199(含HEPE)可以作为猪卵母细胞体外延迟保存液。为完善体外延迟保存体系,确立更好的延迟保存条件,设计将卵母细胞放入TCM199(含HEPE)后分别在4℃、25℃和37℃中保存6-8h后转入成熟培养液,统计分析各试验组之间成熟率,卵裂率和囊胚率的差别。其中4℃试验组成熟率为19.00%,卵裂率为9.5%和无囊胚；25℃试验组成熟率为33.00%,卵裂率为15.00%和无囊胚；37℃试验组成熟率为76.50%,卵裂率为54.50%和囊胚率为13.76%。比较结果得出37℃为理想的体外延迟保存温度。这一研究为实现卵母细胞发育初始时间的可控性提高可能。第二方面,为实现单精注射技术与BAC载体技术相结合制备转基因猪胚胎的目标。需要利用ICSI技术成功制备出猪胚胎。首先将精子以工作3s,间隔3s,功率3w总计60s的参数进行超声波断尾。再利用ICSI技术将精子注入卵母细胞并以170V,901μS条件下电激活受精卵,最后观察胚胎的发育状况。为实现成功制备大片段转基因猪胚胎提供了技术基础。本研究建立了体外延迟保存猪卵母细胞的体系,并建立一种以单精注射为基础,适用广、高效的导入外源基因的转基因技术,并通过ICSI技术向卵母细胞内导入大片段外源基因,制备转基因猪胚胎。(本文来源于《浙江师范大学》期刊2014-03-31）
彭旭,管迟瑜,苗洪伟,滕云,顾春霞[4]（2014）在《猪单精注射转基因胚胎的体外培养与发育》一文中研究指出为探讨建立卵母细胞胞浆内单精注射(ICSI)介导的猪转基因胚胎的体外培养与发育模式,本试验比较了2种猪胚胎培养液(NCSU-23和PZM-3)、不同的精子处理方式(TritonX-100和液氮反复冻融)及不同TSA处理浓度与时间对猪ICSI转基因胚胎体外发育的影响。结果表明,采用NCSU-23和PZM-3培养液所获卵裂率、EGFP阳性胚胎率和囊胚发育率均无显着差异,PZM-3培养所获卵裂率和囊胚发育率略高于NCSU-23培养液。精子经TritonX-100和液氮反复冻融处理后,其EGFP阳性胚胎率虽有增加,但与对照组相比差异不显着,但处理组胚胎卵裂率反而显着低于对照组。在PZM-3培养液中添加25nmol/L TSA处理24h,卵裂率、EGFP阳性胚胎率、囊胚发育率均较处理12h组有所增加,且卵裂率和囊胚发育率略高于对照组,但差异不显着。(本文来源于《动物医学进展》期刊2014年01期）
杨信志,绢谷正之[5]（2013）在《透明带缺失卵经胞浆内单精注射(ICSI)后所形成的单原核受精卵在体外可以继续发育到囊胚期》一文中研究指出广岛市绢谷产妇人科病院临床上,在实施ICSI之前,卵丘-卵母细胞复合体都要经过透明质酸酶处理以去除卵丘细胞。在去除卵丘细胞的过程中偶尔会发生卵胞质从透明带中脱出的情况。从透明带中脱出的形态正常的成熟卵母细胞经ICSI后可以正常受精并发育到囊胚期。在临床上我们遇到这样一个病例,一位原发性33岁的不孕妇女用clomiphene(本文来源于《中国解剖学会2013年年会论文文摘汇编》期刊2013-08-02）
李宁,剧世强,林鹏飞,郝元斌,芮荣[6]（2010）在《猪胞浆内单精注射胚胎培养过程中DNA甲基化水平变化及B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)的表达》一文中研究指出采用Real-time PCR技术,对猪未成熟(GV期)、成熟(MⅡ期)卵母细胞和体外受精(IVF)及胞浆内单精注射(ICSI)2-、4-、8-、16-细胞胚胎和桑椹胚DNA甲基化相关基因(Dnmt1和Dnmt3a)的表达进行检测,并检测胚胎抗凋亡基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达水平。结果发现,Dnmt1在卵母细胞呈高水平表达;在胚胎发育早期,IVF胚胎和ICSI胚胎的Dnmt1的表达量均急剧降低,可能与胚胎早期的去甲基化有关;与IVF胚相比,ICSI胚胎具有相同的Dnmt1表达趋势,只有在4-细胞时高于IVF胚胎。Dnmt3a在卵母细胞成熟过程中就开始下降,经2-～8-细胞阶段的低水平表达后又开始上升。与IVF胚胎相比,ICSI胚胎8-细胞后Dnmt3a表达量小于IVF胚胎。随着胚胎的不断发育,IVF与ICSI胚胎的抗凋亡基因Bcl-2mRNA表达量均逐渐下降,且ICSI胚胎的下降趋势更为明显,说明胚胎抑制凋亡的能力下降,有可能是影响胚胎发育的主要原因。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2010年05期）
李斌[7]（2010）在《非阻塞性无精症的患者实施前期精索静脉结扎术对胞质内单精注射结果的影响:一个回顾性试验性研究》一文中研究指出目的:检验我们对胞质内单精注射的回顾性研究数据并鉴定非阻塞性无精症患者的精索静脉曲张高位结扎术史对于胞质内单精注射是否有利。方法:这个回顾性研究是在巴什肯特大学的产科、妇科、试管婴儿组和泌尿外科实施的。因非阻塞性无精症导致不育而定于实施胞质内单精注射治疗(应用促性腺激素或者促性腺激素释放激素方案控制卵巢排卵)并被选择为研究对象的夫妇被分为两组:第一组(31对)包含了接受了前期精索静脉曲张高位结扎术的患非阻塞性无精症的夫妇;第二组(65对)包含了没有实施前期精索静脉曲张高位结扎术的非阻塞性无精症的夫妇。结果:精索静脉曲张高位结扎术患者组的精子恢复率较高,且两组间精子恢复率有显着差异(精子恢复率分别为60.81%和38.46%,P=0.01)。临床怀孕率和活产率在精索静脉曲张高位结扎术组显着地较高(分别为74.2%vs 52.3%和64.5%vs 41.5,P<0.05)(本文来源于《泌尿外科杂志(电子版)》期刊2010年01期）
常灏[8]（2009）在《HSL敲除小鼠睾丸精子受精能力的单精注射研究》一文中研究指出HSL在脂肪的代谢中发挥着重要的作用,不仅具有分解叁酰基甘油的活性,而且对二脂酰甘油、单酰基甘油及胆固醇酯也有脂解活性。对HSL基因敲除雄性小鼠的各项生理功能进行分析后,发现其在精子的发生过程中也起着十分重要的作用。HSL基因敲除雄性小鼠的精子数量稀少,组织切片显示其附睾中除了含有少量细胞碎片外,几乎不存在精子,但其睾丸内仍有少量的精子发生。精子数量的稀少是导致HSL基因敲除小鼠不育的直接原因,然而HSL基因的敲除是否同时影响了精子的受精能力,其睾丸内为数不多的精子是否具有使卵子受精的能力尚无文献报道。因此,本实验采用卵胞浆内单精子注射技术,将来自HSL基因敲除雄性小鼠睾丸的精子注射到正常的卵子中,以受精卵的发育情况作为检测精子受精能力的标准。如果将精子注入卵子后,受精卵发育到了2细胞的胚胎,则说明HSL基因敲除雄性小鼠睾丸中的精子仍具有使卵子受精的能力,HSL的缺失并未影响精子的功能,只是使得精子发生大为减少,从而导致了雄性不育。如果注射了该精子的卵子未受精,则说明HSL的缺失导致精子丧失了使卵子受精的功能。本实验共使用了5只HSL-/-雄鼠,每次实验取一只雄鼠的精子做ICSI'采用KM雌鼠形态正常的卵子作为注射的受体。五个注射周期共注射73个卵子,最后得到了8个发育至2-细胞的胚胎,其中一个形态良好,其余的卵裂不均,卵裂球大小不一。实验结果表明,HSL-/-小鼠睾丸中的精子可以使卵子受精,并可以在体外发育至2-细胞胚胎。但该胚胎是否具有完全的发育潜能,尚需进行胚胎移植等后续实验才能证实。(本文来源于《首都师范大学》期刊2009-05-09）
高娟[9]（2009）在《大鼠精子冷冻保存及胞浆内单精注射的研究》一文中研究指出精子冷冻是保存实验动物种质资源的有效手段,冷冻保存技术研究及冻精利用已成为一项迫切的研究任务,具有重要的研究意义和实用价值。大鼠精子冷冻保存迄今未获突破性进展,其冻精解冻后活力严重下降,难以用于常规的体外受精。本试验通过检测冷冻对精子结构的影响,为大鼠精子冷冻保存提供实验依据；在大鼠精子冷冻保存的基础上,以Piezc操作系统为支撑,利用大鼠冻精进行胞浆内单精注射研究,以期建立有效的大鼠胞浆内单精注射技术体系,提高大鼠冻精利用率1.超低温冷冻保存对大鼠精子结构与功能的影响本研究旨在优化大鼠精子冷冻保存方法,并利用荧光染色技术检测冷冻对精子结构与功能造成的影响。大鼠精子于5℃水浴平衡30 min,然后装入0.25 mL细管,液氮面上3 cm处平衡10 min投入液氮保存,采用37℃水浴解冻10s。实验表明,采用日本进口大鼠精子冷冻保护液所获冷冻结果较其他实验组结果好,解冻后精子活力为8.9%。低渗肿胀实验表明,大鼠精子质膜与小鼠、家兔的精子质膜存在一定差异；FDA-PI和AO染色发现,解冻后的精子质膜完整率和染色体完整率均接近100%;FITC-PNA染色发现冻精顶体完整率有所下降；RH123染色发现,解冻后精子线粒体受损严重,荧光染色出现分节或不着色现象。比较鲜精与冻精的体外受精,结果冻精体外受精率仅为17.5%,显着低于鲜精的体外受精率(75.3%；P<0.05)；将形态正常的2-细胞进行体外培养,两组的8-细胞发育率(11.1%对56.0%)和囊胚发育率(0对23.3%)差异显着(P<0.05)2.大鼠冻精的胞浆内单精注射研究本实验以piezo操作系统为技术支撑,系统比较注射针直径、采卵时间、操作液、PVP浓度和精子状态等对大鼠胞浆内单精注射的影响,并对不同品系大鼠进行ICSI研究,比较ICSI胚胎与IVF胚胎的卵裂与发育情况。(1)用直径为7～10μm和2～4μm注射针进行大鼠ICSI操作,所获卵母细胞存活率(30.5%对61.3%)和卵裂率(12.5%对51.1%)均差异显着(P<0.05)；较小直径的注射针更有利于ICSI操作。(2)在注射hCG后14、16和18h采卵作ICSI,3组存活率(77.4%和74.1%对69.6%)差异不显着(P>0.05),但18h组的卵裂率显着低于14和16h组(31.3%对60.8%和56.0%；P<0.05),说明14～16h后采卵进行ICSI最合适。(3)用不同的显微操作液Hepes-mR1ECM和Hepes-mKRB进行大鼠ICSI,卵存活率相近(79.2%对75.9%),卵裂率(70.5%对75.0%)差异不显着(P>0.05),但囊胚发育率(21.2%对35.1%)差异显着(P<0.05),在显微操作液中添加3%蔗糖后结果无明显改善。(4)精子操作液中不添加PVP时,卵存活率和卵裂率均高于5%、10%浓度组,可见不添加PVP的精子操作液更有利于注射卵的发育。(5)用不同状态精子进行ICSI,结果显示,超声处理精子与无超声处理对照组之间的卵裂率差异显着,超声处理有利于ICSI胚胎的发育。mKRB组精子的卵裂率要高于冷冻保护剂冻精组,且与鲜精组相近(78.9%和79.8%对77.6%),说明不受冷冻保护剂保护的冷冻精子仍然具有受精能力。(6)由于遗传背景不同,Wistar和F344、SD的卵裂率(50.6%对74.0%、68.4%)差异显着,F344和SD相比,则差异不显着。(7)冻精IVF的卵裂率(17.5%对63.6%、75.3%、68.3%)、8-细胞发育率(11.1%对48.6%、56.0%、49.3%)和囊胚率(0%对22.9%、23.3%、21.7%)均显着低于其他3组；冻精ICSI的卵裂率和胚胎发育率与鲜精IVF、ICSI无显着性差异(P>0.05)。(8)挑选形态良好的2-细胞分别进行体外培养和胚胎移植,结果ICSI胚胎4-细胞发育率(69.5%对87.9%)、8-细胞发育率(48.6%对60.7%)与体内受精胚胎差异显着,但桑椹胚发育率(34.2%对38.3%)和囊胚发育率(22.9%对29.9%)差异不显着。大鼠ICSI胚胎经移植后产下仔鼠,表明本实验初步成功建立了SD大鼠的ICSI操作技术和方法。(本文来源于《南京农业大学》期刊2009-05-01）
陈少轻[10]（2009）在《牛卵胞质内单精注射（ICSI）的研究》一文中研究指出本研究探讨不同化学激活方法,死、活精子和不同部位精子及精子的预处理对牛ICSI结果的影响,以期优化牛ICSI的操作技术和体外培养条件。将冷冻/解冻牛精子或睾丸精子、附睾(头、体和尾)的精子注入体外成熟24h的牛卵母细胞中,经体外培养,观察其发育情况。研究结果如下:试验一,比较不同的激活方法A23187+(CHX+CD)+CHX、A23187+6-DMAP和Ionomycin+6-DMAP对牛ICSI卵的激活效果。A23187+(CHX+CD)+CHX组与A23187+6-DMAP组的卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率差异不显着(60.6%和58.2%,15.1%和14.5%,4.5%和3.6%,P>0.05),Ionomycin+6-DMAP组的卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率(79.3%,31.0%和14.5%)显着高于其它两组(P<0.05)。试验二,比较牛死精子和活精子对ICSI卵发育效果。两组之间的卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率均无显着性差异(75.0%和79.4%、27.9%和30.9%、13.2%和16.2%,P>0.05)。试验叁,比较牛不同部位精子ICSI卵发育效果。睾丸或附睾(头、体和尾)的精子ICSI后,四组之间的卵裂率、囊胚率和囊胚孵化率差异不显着(79.1%,79.5%,73.2%,75.0%;23.3%,20.5%,19.5%,18.2%和14.0%,13.4%,12.2%,9.1%,P>0.05)。试验四,研究了DTT预处理精子对ICSI卵的发育效果。(1)用DTT预处理精子1h,3h和5h,随着处理时间的延长,3h和5h组的精子核发生解聚的比率显着高于1h组(43.2%,49.8%和0.0%,P<0.05)。(2)用DTT预处理精子1h后用于ICSI,对照组相比,用DTT预处理精子组的解聚率和雄原核形成率显着高于对照组(30.4%和11.6%,47.8%和27.9%,P<0.05),但对卵裂率无显着差异(85.0%和80.0%,P>0.05),囊胚率和囊胚孵化率亦显着提高(45.8%和26.0%,31.3%和14.0%,P<0.05)。以上结果表明:(1)牛的ICSI用5μM/LIonomycin和2mM/L6-DMAP联合激活培养3h能够提高注射卵母细胞的发育率;(2)死精子亦可以用于牛ICSI;(3)从睾丸到附睾尾获取的精子,尽管处于不同的成熟阶段,但是对ICSI的注射卵母细胞发育均不产生显着影响;(4) DTT可以促进精子解聚,用5mM/L DTT预处理牛精子1h能促进原核形成和胚胎发育。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2009-05-01）
单精注射论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
脊椎动物卵母细胞成熟分裂和早期胚胎发育过程均受到多种蛋白激酶的调节。近年来对于卵母细胞成熟、激活和受精的分子机制研究取得了很多进展。Aurora激酶是广泛分布在真核生物体内的丝/苏氨酸蛋白激酶家族,有证据证明Aurora激酶在哺乳动物卵母细胞成熟和激活过程中也起着关键性的作用。在哺乳动物,已发现Aurora激酶的同源蛋白,分别为Aurora-A、-B和-C。它们具有相似的结构,即相对保守的C末端和长度多变的N末端；但这3种同源蛋白在自身表达、亚细胞定位及酶激活时间等方面都各不相同。Aurora-B是丝/苏氨酸蛋白激酶家族中的一员。由于Aurora-B激酶在许多实性肿瘤中过量表达,表现出致癌基因的作用,在癌症研究中Aurora-B常被作为治疗的重要靶点。最近的研究表明,Aurora-B在调控卵母细胞成熟分裂进程和早期胚胎发育的相关信号通路上扮演着重要角色。哺乳动物卵母细胞的成熟分裂阻滞和恢复的机制,以及受精卵早期发育过程中,尤其是首次有丝分裂由1-细胞(合子)向2-细胞转换的机制,是当前生殖和发育生物学研究的热点之一。研究Aurora-B对猪卵母细胞成熟分裂和辅助受精后首次卵裂的调控,对于认识生殖发育机理、实施生殖调控都具有重要的意义。目前,虽然在Aurora-B调控低等动物(如非洲爪蛙)卵母细胞成熟分裂进程和相关信号通路上取得了一些成果,但有关Aurora-B在哺乳类卵母细胞成熟分裂及早期胚胎发育过程中的表达定位与功能研究较少。已有的报道主要集中在小鼠受精卵和爪蛙卵母细胞上,有关猪卵母细胞成熟分裂和首次有丝分裂过程中Aurora-B mRNA或蛋白的表达规律与功能迄今未见报道。胞质内单精注射(ICSI)技术在哺乳动物上的应用十分广泛,已在诸多领域发挥出它的独特作用。应用ICSI技术体外生产胚胎,有助于准确掌握受精时程,便于观察精卵融合及重要受精事件的发生。ICSI作为实验手段已被广泛用于受精生物学研究,是开展受精基础研究的有效实验模型。本研究将ICSI操作、荧光定量PCR分析和免疫荧光染色技术相结合,检测猪卵母细胞成熟分裂和ICSI胚胎首次有丝分裂过程中Aurora-B mRNA和蛋白的动态表达及亚细胞定位；在此基础上,通过Aurora-B的特异性抑制剂AZD-1152的特异性抑制试验,分析Aurora-B对猪卵母细胞成熟和单精注射后首次卵裂进程的影响,以期为了解猪卵母细胞成熟分裂和胚胎早期发育的分子机制提供实验依据。实验结果如下：1.猪卵母细胞成熟分裂过程中Aurora-B mRNA水平的变化在猪卵母细胞成熟分裂过程中,0h(GV期)时,Aurora-B mRNA表达量最高；20 h的表达量最低；在30、36和44 h表达量虽有所升高,但仍显着低于0h组(P<0.05)。而30和44 h的Aurora-B mRNA表达水平高于20和36h组。2.猪卵母细胞成熟分裂过程中Aurora-B与α-tubulin的共定位0h GV期卵母细胞,微管未开始组装,Aurora-B均匀分布在细胞质中,未检测到其特异性存在；GVBD发生后,Aurora-B蛋白与a-tubulin集中分布于染色体附近,合成图像显示两者完全重迭；随着成熟分裂进行至MⅠ期,染色体排列在赤道板上,Aurora-B的定位也与a-tubulin重迭。MⅠ后期,Aurora-B仍定位于纺锤体上；临近MⅡ期,Aurora-B的定位则随着纺锤体位置的改变而有变化,主要定位于卵母细胞核及第一极体(pbI)。3.AZD-1152对猪卵母细胞成熟和细胞骨架的影响用Aurora-B特异性抑制剂AZD-1152处理后,阻滞在Pro MI-AI-TI期卵母细胞较对照组明显增加(P<0.05),达到MⅡ期的卵母细胞显着减少(P<0.05),同时MⅡ期卵母细胞发生染色体排列紊乱、纺锤体形态异常、微丝断裂和分散的比例增加。4.抑制猪卵母细胞Aurora-B表达对孤雌胚胎发育的影响用AZD-1152抑制猪卵母细胞Aurora-B的表达,与对照组相比,AZD-1152处理组的卵裂率、囊胚发育率和囊胚细胞总数均有显着降低,降低的程度随着所用AZD-1152浓度的增加而增加；抑制猪卵母细胞Aurora-B表达,孤雌胚胎的发育受到严重影响。5.猪ICSI胚胎首次有丝分裂进程的观察ICSI重构胚激活后18h,雌雄原核已完成融合,合子形成,受精完成。20h时,姐妹染色单体在纺锤丝的牵引作用下,向细胞两极分离。22h时,染色质已位于细胞两极,卵裂沟形成,细胞质进入分裂状态。到了24h,细胞质分裂完成,胚胎完成首次有丝分裂过程。6.猪ICSI胚胎首次卵裂过程中Aurora-B mRNA的表达随着首次有丝分裂的进行,猪ICSI胚胎激活后20、22和24 h, Aurora-B mRNA的表达均较18h组显着升高(P<0.05),且在24 h达到最高,并显着高于其它各组。22h组与20h组相比,Aurora-B mRNA表达水平有所降低,但差异不显着(P>0.05)。7.猪ICSI胚胎首次卵裂过程中Aurora-B与a-tubulin的共定位在18h时,合子处于首次有丝分裂过程,此时Aurora-B在极体附近表达较高；到了20h时,细胞处于有丝分裂后期,Aurora-B蛋白的定位与纺锤体的位置完全重合；22h时,Aurora-B的定位与染色体的位置重合；24h时,细胞分裂末期,Aurora-B依然与微管的位置重迭,其定位紧随纺锤体。8.抑制Aurora-B表达对猪单精注射胚胎首次卵裂的影响利用特异性抑制剂AZD-1152抑制Aurora-B表达,发现随着抑制剂浓度的增大,猪ICSI重构胚形成单个细胞核的几率显着增加；而对胞质分离的抑制作用也较为明显,随抑制剂浓度的增加,处理组卵裂率与对照组相比显着降低。9.抑制Aurora-B表达后猪单精注射胚胎首次卵裂过程中Aurora-B及Mad2 mRNA的变化用AZD-1152抑制Aurora-B表达后,单精注射胚胎的Aurora-B与Mad2mRNA表达水平均有不同程度下降。20和24 h处理组胚胎Aurora-B mRNA表达水平较对照组显着下降。对照组Mad2 mRNA表达水平在18、22和24h差别不大,但20h组表达水平最高；而处理组胚胎Mad2 mRNA的表达水平均较对照组降低,在20h组表达最低。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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