王利霞[1]2005年在《5-氮胞苷体外诱导人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究》文中提出近年来,急、慢性缺血性心脏病(ischemic heart disease,IHD)的基础研究和临床治疗均有较大的进展,尤其是心血管药物治疗学和心脏介入技术水平不断提高,急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)的死亡率明显下降,但心肌梗死后心功能衰竭的发病率和致残率仍居高不下,已成为危害人类健康的主要疾患之一。目前临床治疗缺血性心脏病的常用治疗手段主要包括药物治疗、内科介入治疗、外科手术治疗等。这些治疗方法的主要作用是改善局部血运,挽救濒死心肌,增加存活心肌功能,而非针对病变冠状动脉的再造和梗死心肌再生、重建的根本性治疗方法。干细胞的研究和应用为心肌坏死性疾病提供了新的治疗方法。 细胞治疗(cellular therapy)通过移植功能细胞,替代、修复或加强受损的组织或器官的生物学功能,已成为治疗多种组织坏死性疾病的新策略。细胞移植(cellular transplantation)、心肌再生(myocardial regeneration),可以增加梗死区功能心肌细胞数量,改善心肌功能,逆转心室重塑,是目前研究的热点。骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)因其独特的生物学特性在干细胞研究领域倍受重视。骨髓中有两种类型干细胞,造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)和间充质干细胞。骨髓MSCs是存在于骨髓基质内的非造血细胞来源的细胞亚群,是中胚层发育的早期细胞,不仅可以分化为造血实质和造血基质细胞,还可以分化为许多造血以外的组织,特别是中胚层和神经外胚层来源组织的细胞。研究发现MSCs在体内或体外诱导条件下可以分化为心肌样
从长伟[2]2007年在《骨髓间充质干细胞移植对猪缺血心肌影响的实验观察》文中认为近年来，缺血性心脏病(ischemic heart disease，IHD)发病率和死亡率逐步增高，其中冠心病(coronary heart disease，CHD)急性心肌梗死和充血性心力衰竭严重损害人类的健康。急性心肌梗死后心肌细胞坏死和疤痕形成，继之发生左室重塑、甚至室壁瘤形成，心功能下降。虽然人体心脏具有一定自我修复的能力，但是过程短暂，不足以防止急性或慢性心肌病理性改变，最终发展为严重的临床心脏疾病。目前冠心病的主要治疗方式包括药物治疗、介入治疗和手术搭桥，这些治疗只能缓解症状，重建血运，但仍然存在术后血管的堵塞、再狭窄、不能再生心肌以替代疤痕组织等问题，并且部分患者因冠状动脉弥漫性狭窄不宜做此类手术。而心脏移植手术费用昂贵，供体少，手术具有一定风险和难度，难以推广，从而促使人们寻找新的治疗方式。越来越多的证据表明，骨髓来源的干细胞如骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)、血谱系阴性(血谱系特异性抗厚干细胞因子受体)骨髓干细胞等均能够参与缺血心肌血管新生，改善心脏功能，因而骨髓来源的干细胞移植修复心肌梗死和防止梗死后充血性心力衰竭是一个颇具前途的治疗方向。本实验用猪自体骨髓间充质干细胞进行心肌移植，以探讨心肌梗死后干细胞移植对猪心肌功能和缺血心肌血管再生的影响。1．利用心导管介入技术建立心肌梗死猪动物模型：利用心导管注射明胶海绵栓子，栓塞猪的左前降支(LAD)，建立猪心肌梗死模型；2．骨髓干细胞的体外分离培养：在建立心梗模型同时，经猪骼前上棘抽取骨髓10-15ml，应用Ficoll-Paque密度梯度离心法进行体外培养、增殖和标记，得到骨髓间充质干细胞。3．开胸干细胞移植术：心肌梗死模型后建立成功后第4周，存活的中国小型香猪12只随机分为2组，每组6只，A组：对照组；B组：移植组。通过开胸手术经心外膜下向两实验组梗死心肌分别注射等量的DMEM培养液或骨髓间充质干细胞。4．观察指标：栓塞冠状动脉前后、MSCs移植前及移植后4周进行胸外心脏超声检测心脏结构、室壁运动及功能变化；术前3天、术后4周单电子发射计算机断层扫描机(SPECT)行心肌灌注显像，了解治疗前后的心功能变化，评估MSCs移植对心肌梗死的治疗作用；最后一次心肌灌注显像后处死动物，取出心脏标本，通过H．E．染色及CD31单克隆抗体免疫组化染色法检测心肌血管密度，据此推测MSCs移植对缺血心肌血管再生的影响。结果1．经心导管栓塞猪的左前降支后，在左室前壁形成一约3×3cm透壁梗死区，该部位心肌坏死完全，心功能检测左室各项指标下降明显；2．MSCs移植后实验组与对照组相比，超声心动图显示左室射血分数(EF)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)等在内的各项心功能指标均有改善，移植后两组实验动物EF、LVEDD、LVESD数据比较差别有统计意义(P＜0.05)；3．SPECT心肌灌注显像显示：实验组左室射血分数(EF)、1／3射血分数(1／3EF)、1／3充盈分数(1／3FF)优于对照组，术前3天与术后4周的增加值差异有显着性(P＜0.05)；4．HE．染色及CD31单抗免疫组化提示：实验组与对照组相比，血管密度有明显上升，有显着性差异(P＜0.05)。结论1．采用心导管介入技术，经猪冠状动脉注射明胶海绵栓子方法，建立缺血性心肌梗死模型，稳定可靠，接近临床病理生理过程，可作为研究心肌梗死的技术平台。2．经心外膜下注射骨髓间充质干细胞治疗缺血性心脏病，是可行、有效、安全的移植途径。3．骨髓间充质干细胞移植可明显改善心肌梗死后心肌功能。4．骨髓间充质干细胞移植后可分化成为血管内皮细胞，参与血管再生，改善缺血心肌的血流灌注和细胞活力。
胡雅光[3]2013年在《干细胞移植治疗缺血性心脏病:临床应用的可行性与安全性》文中认为背景:干细胞移植到受损的心脏组织,可以大量分化为心肌细胞,这项研究为缺血性心脏病治疗带来新的希望。目的:探讨干细胞移植治疗缺血性心脏病的可行性与安全性。方法:分析干细胞移植治疗缺血性心脏病安全性和可行性的多种试验方法。REPAIR-AMI试验是一项分析急性心肌梗死后即刻冠脉内移植骨髓祖细胞治疗效果的随机双盲、安慰剂对照的多中心研究;MAGICCell-3-DES试验是评价粒细胞集落刺激因子动员的干细胞疗法的安全性和冠脉内注射动员的外周血干细胞对急性心肌梗死和陈旧性心肌梗死的效果;BOOST试验是心肌梗死后经冠脉移植自体骨髓细胞的随机对照研究。PROTECT-CAD试验是一项随机、对照的直接将干细胞注入心肌治疗慢性缺血性心肌病的临床试验。结果与结论:干细胞移植可以改善左心室的收缩功能和舒张功能以及冠脉血流储备,相关研究也得到验证。对于干细胞移植治疗缺血性心脏病,可以增加左室射血分数,临床事件较少,在药物洗脱支架治疗的基础上,干细胞治疗并不增加再狭窄风险。干细胞移植治疗缺血性心脏病安全可行,未来还需要进行大样本、长时间的大规模多中心的随机对照研究,来进一步评价其疗效和风险。
马翔[4]2007年在《自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死疗效评估及活体示踪研究》文中研究说明目的:有关骨髓间充质干细胞(MSC)移植至急性心肌梗死(AMI)组织后的转归及作用机制仍不明确。本包括研究:1)建立猪AMI模型,行心肌直接注射移植自体MSC,观察心功能变化并探讨相关机制;2)探讨应用超强顺磁性铁氧化物(SPIO)标记MSC的条件及方法;3)探讨应用MRI活体示踪SPIO标记的干细胞心肌移植的可行性及有效性;4)探讨经冠状动脉内注射骨髓单个核细胞治疗急性前壁心肌梗死(AMI)的中期临床疗效及安全性。方法:1)本课题第一部分选择10只家猪,体重35～45kg,经导管应用球囊持续封堵前降支动脉血管,建立急性心肌梗死动物模型。将成功建立模型的9只动物随机分为2组:实验组5只动物取骨髓血,分离MSC,体外培养扩增,建立模型2周后通过心肌注射的方法将自体骨髓MSC(1.25×10~6～7.54×10~6)移植至AMI区及交界区;对照组动物注射等量生理盐水。移植后行经胸超声检查观察心脏局部与整体心功能变化;心肌核素灌注显像检查评估左心室心肌缺血节段的改善;HE染色观察心肌组织坏死及修复变化;Van-Gieson染色观察心肌梗死后纤维组织增生情况;免疫组化检测心脏结蛋白(Desmin)、心脏连接蛋白(Connexin-43)和心肌早期转录蛋白(GATA-4)的表达;2)本课题第二部分选择8只家猪,体重35～45kg,经导管应用球囊封堵前降支动脉建立心肌梗死模型。成功建立模型的7只动物随机分为2组:SPIO标记的MSC移植组(n=4),未行SPIO标记的对照组(n=3)。使用Feridex I.V溶液、FeridexI.V.-脂质体混合物及Feridex I.V.-聚赖氨酸混合物分别标记MSC,按25μg SPIO加入1ml的DMEM培养24h,使细胞终浓度为(5～9)×10~6/ml,显微镜下观察细胞形态,台盼蓝染色测定细胞活力,普鲁士蓝染色观察SPIO与细胞的结合。以流式细胞仪检测CD44、CD106在原代、第4代、第6代的MSC的表达。建立模型2周后开胸,在梗死区中央及梗死边缘区共5个点注射移植注射细胞(3.6×10~6～9.4×10~6)。于移植前、移植后1h、2周及4周,使用1.5T核磁影像机行心脏MRI检查,观察梗死区中央及梗死边缘区的细胞移植区有无低信号改变。移植后4周,处死实验动物,取心脏组织行HE染色观察心肌组织坏死及修复;普鲁士蓝染色观察移植区有无SPIO标记的MSC的表达;心肌组织荧光免疫组化检测心脏结蛋白、心脏连接蛋白和心肌早期转录蛋白的表达;行扫描电镜及投射电镜观察SPIO在MSCs表面和细胞内的表达;3)课题第叁部分选择8例急性前壁心肌梗死患者,在接受标准药物治疗和介入治疗基础上,经皮冠状动脉内介入治疗后应用Over-the-Wire(OTW)球囊将自体骨髓单个核细胞注入冠状动脉前降支血管,定位以PCI时植入的支架为参考依据。移植前及移植后行经胸心脏超声心动图,测定左心室收缩功能及整体左心室射血分数;行~(99m)Tc-MIBI心肌核素灌注及代谢显像,计算存活及坏死心肌的面积。术后所有患者均进入监护病房持续监护24小时,临床随访时间至少6个月,随访观察心血管事件及不良事件的发生。结果:1)在建立心肌梗死模型中,1只动物发生顽固性室颤死亡,9只动物成功建立心肌梗死模型并成功移植BMCS,建立模型成功率为90%。建立心肌梗死后9例动物行心肌核素显像示左室心尖部及近室间隔部灌注缺损。MSCs移植后4周,核素心肌显像提示对照组仍显示前壁、心尖部灌注缺损,与生理盐水注射前无变化;而心肌注射骨髓干细胞4周后,核素心肌显像提示前壁、心尖部灌注缺损比注射前明显减少。与干细胞移植前相比,实验组室间隔及心室前壁变薄不明显,左室梗死区室壁厚度(IWT)为(4.6±0.3 VS 4.2±0.2,t=2.769,P＜0.05),室壁运动趋于正常(8.0±0.3 VS 7.4±0.4,t=2.982,P＜0.05),LVEF增高(66.4±6.1 VS 60.0±3.8,t=1.988,P＜0.05)。对照组移植后与移植前比较,IWMVs减小,心肌梗死局部室壁变薄,EF减低。移植后实验组IWMVs高于对照组(8.0±0.3 VS 6.9±0.2,t=6.315,P＜0.05),IWT较对照组增加(4.6±0.3 VS 3.9±0.2,t=4.919,P＜0.05),EF改善(66.4±6.1 VS 54.0±1.4,t=3.926,P＜0.05)。由此可见骨髓间充质干细胞移植可以改善梗死心脏的局部与整体心功能。免疫组化检查结果提示在移植区域可见心肌结蛋白、Connexin蛋白和GATA-4表达的阳性细胞,提示MSC植入心肌后可以长期存活并分化成为具有心肌细胞功能的细胞;病理检查发现移植区内有核大胞浆小的移植细胞,提示注射至心肌梗死区的MSC处于分化阶段;2)在建立心肌梗死模型后,MRI检查显示7只动物前壁及心尖部均有灌注缺损区,延迟显像强化,提示心肌梗死模型成功建立。经过24h体外标记,各标记组均可见SPIO与骨髓间充质干细胞结合。叁个标记组中SPIO 24小时标记效率均高于90%,SPIO-PLL混合溶液标记MSC的有效率最高,达(95.5±8.2)%。SPIO.-PLL混合溶液标记的细胞存活率(94.7±3.2)%优于SPIO-LFA组(87.5±4.0)%,(P＜0.05)及SPIO组(86.6±6.1)%(P＜0.05)。SPIO-PLL混合溶液标记的MSC的存活率在标记前是(95.7±3.6)%,标记后为(94.7±3.2)%,P＞0.05,二者差异无统计学意义。经含铁血黄素染色后,叁个标记组中与SPIO颗粒结合的细胞胞核染成红色,胞浆中可见大小不一的蓝绿色颗粒。扫描电镜检测发现SPIO标记的骨髓MSCs表面有均匀分布的颗粒状物质,投射电镜发现SPIO标记组细胞浆内大量黑色含铁小体,细胞表面可见小针样铁颗粒。采用猪全骨髓细胞贴壁分离法筛选MSC,在培养4代后CD44,CD106的表达均为阳性,表明可以获得纯化的MSC群体。开胸心肌移植后1h,SPIO标记的干细胞移植组中4只动物(100%)MSC移植区在磁共振上呈明显的低信号改变,移植后2周4只动物(100%)MRI呈明显的低信号改变,术后4周示3只动物(75%)细胞移植区有低信号改变。大体标本可见心尖部梗死区室壁明显变薄,SPIO标记组移植部位可见暗褐色移植物。普鲁士蓝染色检查发现在移植后4周与SPIO注射部位对应的组织染色阳性,提示SPIO标记的MSC移植入心肌4周后仍在心肌组织内存活;心肌组织荧光免疫组化检测心脏结蛋白、心脏连接蛋白和心肌早期转录蛋白均有表达,提示移植的MSC在心肌移植区内分化为具有心肌功能的细胞;3)8例前壁急性心肌梗死患者骨髓单个核细胞冠脉内移植均成功,术中、术后无严重并发症。所有患者在骨髓单个核细胞移植过程中及移植术后均无不适主诉,血压,心率均无明显变化。移植后患者LVEF 1个月时为(48.1±10.0)%,与术前相比未见明显变化(43.7±5.8)%,P＞0.05;3个月时为52.6±10.0,(P＞0.05),移植后12月为(56.2±9.5)%,与术前相比有改善,但是无统计学差异(P＞0.05)。SPECT心脏显像结果表明骨髓单个核细胞移植后缺血心肌节段及梗死心肌节段数明显减少。至最后一次随访时,患者缺血心肌改善1个节段以上7例(87.5%),无改善1例(12.5%),缺血增0例(0%)。患者术后6个月6分钟步行实验结果为(412.3±73.8)m,较移植术前明显改善(379.4±80.6),P＜0.05。8例患者随访2～23个月均无心悸感觉,心电图及24h动态心电图未发现恶性心律失常,无一例发生死亡、再次心肌梗死、心衰加重再次就诊等心血管事件。无一例患者发生新发肿瘤、支架内再狭窄、支架内血栓等不良事件。结论:1)通过球囊封堵冠状动脉血管建立猪急性心肌梗死模型,建模效率高,建模中应用缺血预处理及药物减少心律失常的发生,为MSCs移植治疗研究提供了良好的实验模型;2)通过心肌直接注射移植家猪自体骨髓MSC,在移植区可见检测心肌细胞结蛋白、Connexin蛋白和GATA-4的表达阳性细胞,提示MSC植入心肌梗死区后可以存活并分化为具有新生心肌功能的细胞;3)MSCs心肌注射移植可以改善心肌梗死后心脏局部与整体心功能,增加梗死区室壁厚度,改善梗死部位室壁运动;4)SPIO标记的干细胞在MRI上呈低信号改变,在心肌移植后4周仍可以被MRI检出,提示应用MRI技术活体示踪动态观察移植的MSC是可行有效的;5)应用SPIO、SPIO-脂质体、SPIO-多聚赖氨酸等经过24h体外标记MSCs,均可以与骨髓间充质干细胞有效结合,标记率均大于90%,细胞活力及形态未受影响,表明SPIO是一种安全、高效的细胞标记物;6)中期随访提示骨髓单个核细胞移植可以抑制急性前壁心肌梗死后左室腔的扩大,提高左室射血分数,改善心肌梗死后左心室心肌缺血,并发症少、安全性好。
王燕[5]2004年在《自体骨髓干细胞移植治疗缺血性心脏病的实验研究》文中提出背景 心肌梗死所致的细胞丢失、瘢痕形成和心室重构是影响心脏功能的主要因素,也是导致顽固性心力衰竭的病理基础。目前的药物治疗、介入治疗及冠脉旁路手术能够改善心肌缺血,但却不能逆转已经坏死的心肌,更不能促进心肌细胞再生,而心脏移植的供体少、费用高及慢性排异反应等缺点也限制了其临床应用。因此,寻求一种更加有效、可行和完善的治疗手段已成为目前临床的迫切需求之一。 干细胞是一族具有自我复制和具有多向分化能力的细胞。最近研究将某些类型的干细胞通过细胞移植的方法种植到病变区域,使其增生分化为心肌细胞和/或血管内皮细胞,从而增加和恢复具有完善收缩功能心肌细胞的数目,逆转心室重塑,取得了鼓舞人心的成就。多个干细胞移植治疗心肌梗死的临床试验的成功标志着我们将进入心脏病治疗的新时代,不仅仅是保护和维持还存活的心肌,还要积极的应用干细胞来再生心肌。 干细胞移植治疗缺血性心脏病已成为新的研究热点,而适宜的心肌缺血模型、移植细胞类型、移植时间和方式、移植细胞的示踪问题和分化鉴定问题以及干细胞的分化机制等都是亟待解决的问题。我们试图从以下叁个方面来展开本课题的研究:(1)骨髓干细胞能否在梗死心肌内存活并且分化成为新的心肌细胞?(2)骨髓干细胞移植能否分化为血管内皮细胞,其对促血管细胞因子的分泌作用如何?(3)骨髓干细胞移植对心功能、室壁节段性运动功能的影响如何?
宋嘉[6]2005年在《骨髓干细胞治疗阿霉素诱导的扩张型心肌病的实验研究》文中提出扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy, DCM)发病率近年来呈增高趋势,并且已成为引起充血性心力衰竭的最主要原因之一。目前临床上内科药物治疗、外科手术治疗均效果欠佳,心脏移植手术又存在供体器官有限的缺陷。干细胞治疗对于DCM尤其是终末期心衰患者是一种极富潜力的新的治疗方式。骨髓间充质干细胞(MSC)及骨髓单个核细胞(BMMNC)经研究已证实可明显改善DCM心功能,但尚未见有关二者疗效对比的研究。大多数细胞移植,均是经心外膜、心内膜或冠脉内注射,手术创伤及对操作技术、设备的要求限制了其广泛应用。骨髓自体动员治疗避免了上述缺陷。已有研究证明,骨髓来源的干细胞可迁移至损伤心肌并减轻心肌细胞超微结构的损伤。但关于骨髓自体动员对于阿霉素(ADR)诱导的DCM心脏功能及细胞凋亡的影响则尚未见报道。本实验拟对上述几方面进行研究。 本研究利用ADR(经腹腔注射2.5mg/kg/次,3次/周,共两周)建立ADR诱导的DCM大鼠模型。经超声心动、血流动力学检测及病理组织学检查证实后,将ADR诱导的DCM大鼠随机分组,即细胞移植部分的4个亚组:MSC移植组(移植细胞数5×10~6/50μl,分4点注射于左室前壁)、BMMNC移植组(移植细胞数5×10~6/50μl,分4点注射于左室前壁)、无血清DMEM培养液注射对照组和假手术组及骨髓动员部分的2个亚组:自体骨髓动员组(rhG-CSF50μg/kg/d,连续8d皮下注射)和盐水注射对照组,每个亚组n=10。采用超声心动及生理多导仪检测各组射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)、左室收缩末期内径(LVDs)、左室舒张末期内径(LVDd)、左室收缩压峰值(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)以及左室压力最大上升或下降速率(+dp/dtmax, -dp/dtmax)等心功能指标;采用普通病理学及超微结构电镜进行组织病理学检查。应用TUNEL法行细胞凋亡指数测定,Western blot法行凋亡相关蛋白Bc1-2、Bax、Fas检测,免疫组化染色行Ⅷ因子相关抗原检测,免疫荧光双染行移植细胞鉴定与定位检查。
刘盛[7]2008年在《自体骨髓单个核细胞移植治疗冠心病陈旧心梗的临床研究》文中提出第一部分冠状动脉旁路移植术同期自体骨髓单个核细胞移植治疗冠心病的Ⅰ期安全性研究目的:利用冠状动脉旁路移植手术同期经冠状动脉桥血管内移植自体骨髓单个核细胞的方法治疗冠心病陈旧心梗伴心功能不全患者,评价治疗的安全性和中期临床效果。方法:选择需要外科手术治疗的冠心病陈旧心梗伴左室功能不全患者,应用冠状动脉旁路移植手术同期经冠状动脉桥血管内移植自体骨髓单个核细胞的治疗方法。评价干细胞移植后左室功能改变、不良事件、生存时间和中期随访情况。结果:全组17例患者接受冠状动脉旁路移植术同期经冠状动脉桥血管内移植干细胞治疗。1例术后第3天因脑栓塞死亡。全组患者治疗后早期无心梗发生,无肝、肾功能衰竭,无新发恶性心律失常出现。16例患者平均随访2年全部存活,超声检测左室射血分数上升,心功能和心绞痛症状明显改善并具有统计学意义。结论:冠状动脉旁路移植术同期经冠状动脉桥血管内移植自体骨髓单个核细胞治疗冠心病陈旧心梗的方法是可行的。手术后早、中期随访结果观察,此种治疗是安全的。第二部分冠状动脉旁路移植术同期自体骨髓单个核细胞移植治疗晚期缺血性心脏病的随机、双盲平行对照临床初步研究目的:评价自体骨髓单个核细胞移植对晚期冠心病陈旧心梗患者心功能改善,心绞痛症状减轻,生活质量提高和远期生存率的影响。方法:前瞻性设计入组需要外科治疗的晚期冠心病陈旧心梗患者。在冠状动脉旁路移植手术同期,采用随机双盲,平行对照的方法经冠状动脉桥血管移植自体骨髓单个核细胞。手术后早期随访,应用叁维超声、磁共振评价治疗前后心脏容量和收缩功能的变化;应用核素评价心肌梗塞面积的变化;应用叁维超声评价节段性室壁运动的变化;应用磁共振评价节段性室壁增厚率的变化。评价手术后早期临床症状,运动耐量的变化。研究还包括对干绌胞移植不良事件和远期生存率的评价。结果:初步研究入组20例病例,治疗组9例,对照组11例。手术早期结果无死亡。随访6个月,20例患者均存活。磁共振检查,手术前后患者左室射血分数明显提高,P=0.006,两组间无统计学差异;手术前后干细胞治疗组每搏输出量、心排量、心排指数和左室质量的增加高于对照组,并具有统计学差异,P值分别为0.019、0.047、0.048和0.024;手术前后节段性室壁增厚率明显提高,P=0.001,干细胞治疗组优于对照组,P=0.044。叁维超声检查,手术前后患者左室射血分数明显提高,P=0.023,但两组间无统计学差异;手术前后左室舒张末直径、左室收缩末直径和左室收缩末容积均有下降,具有统计学意义,P值分别为0.001、0.001和0.019,但两组间变化无值无统计学差异。节段性室壁运动积分手术前后无明显差异,两组间变化也无统计学差异。核素SPECT心肌灌注检查,手术后灌注缺损比例缩小,但不具统计学差异(P=0.094),两组间灌注缺损变化也无统计学差异。节段性灌注总积分分析,手术后总积分减小,与手术前相比不具统计学差异(P=0.096);两组间灌注总积分变化无统计学差异。手术前后6分钟步行试验距离明显增加,具统计学差异(P=0.002)。但两组间手术前后变化不具统计学差异。血BNP手术前后变化不具统计学差异,两组间变化差值也不具统计学差异。结论:外科冠状动脉旁路移植术同期自体骨髓单个核细胞经桥血管心肌内移植是安全的,治疗早期临床结果无不良反应发生。第一阶段6个月随机对照双盲的临床试验结果显示:心脏MRI观察到干细胞治疗组每搏心输出量的变化优于对照组,节段室壁增厚率的变化上优于对照组,左室质量的增加也优于对照组。而其它反映整体结构、功能和临床心功能改善的指标在手术后6个月未能出现统计学差异。研究提示第二阶段的临床观察需要更多的病例数量和更长的随访时间。心脏MRI(核磁共振成像技术)对于评价心肌骨髓干细胞移植具有明显优势。可以提供心脏形态、结构和功能的各项参数、指标,更依靠其高度空间分辨率显示室壁运动增厚等细微变化。为临床细胞移植研究提供了敏感、准确的评价方法。第叁部分磁共振对冠心病陈旧心梗所致心功能不全诊断及干细胞移植疗效评价的应用目的:评价磁共振在冠心病陈旧心梗所致心功能不全患者诊断中的价值,同时分析干细胞移植手术的疗效。方法:同时应用心室造影、叁维超声、核素SPECT及MRI测量冠心病陈旧心梗所致心功能不全患者术前心功能指标,包括左室舒张末容积(LVEDV)、左室收缩末容积(LVESV)、左室射血分数(LVEF),比较分析几种检查对冠心病心功能不全患者容量测定及功能评价的优劣。应用双核素SPECT存活心肌显像及心脏MRI延迟增强显像分析术前左室存活心肌,比较分析MRI检测的准确性。应用心脏MRI评价干细胞治疗前后左室功能改变。结果:术前左室造影测得的LVEDV和LVEF与MRI检查测得数据不具相关性,左室造影所测指标高于MRI;左室造影所测LVESV与MRI相近,具有相关性,r=0.62,P=0.014。术前门控SPECT显像测得LVEDV、LVESV与MRI检查测得数据相近并具有相关性,r值分别为0.65和0.66,P值分别为0.002和0.002。术前叁维超声测得的LVEDV、LVESV和LVEF与MRI检查测得数据具有相关性,r值分别为0.61、0.62和0.62,P值分别为0.036、0.014和0.007。心脏MRI延迟增强显像与~(18)F-FDG心肌代谢存活心肌显像具有较好的一致性,Kappa=0.446(P<0.001)。以~(18)F-FDG心肌代谢显像为金标准,心脏MRI延迟增强显像敏感度68.3%,特异度为92.5%。心脏MRI检测干细胞治疗组治疗前后节段性室壁增厚率变化与对照组相比具有统计学差异,P=0.044。结论:MRI能够准确判断冠心病陈旧心梗患者左室容积,功能。在冠心病陈旧心梗所致心功能不全患者中门控SPECT和叁维超声测定左室容积和功能与MRI相关性好。MRI对心梗后存活心肌的判断具有同~(18)F-FDG SPECT相近的特异性,但敏感性仍有差距。MRI用于评价陈旧心梗伴心功能不全患者具有明显优势。可以一次同时提供心脏形态、结构和功能的各项参数,更依靠其高度空间分别率显示室壁运动增厚等细微变化,可以用于心肌干细胞移植后早期疗效的判定。
李科[8]2005年在《自体骨髓间充质干细胞移植对缺血心肌血管再生影响的实验研究》文中提出目的:利用心导管注射明胶海绵栓子,栓塞猪的左前降支(LAD),建立猪缺血性心脏病—心肌梗塞模型。并通过心导管行骨髓间充质干细胞移植,探讨这种新方法对缺血心肌血管再生的影响及对心肌梗塞后心功能的影响。 方法:经猪髂前上棘抽取骨髓20ml,培养得到骨髓间充质干细胞。心肌梗塞第4周,10只太湖梅山猪随机分为2组。A组:对照组;B组:实验组,每组5只。经心导管向梗塞心肌注入等量的培养液或骨髓间充质干细胞。移植后第4周行心脏超声检查,并在细胞移植后不同时间点检测血清VEGF和ET值,最终获取猪心,通过H.E.染色及CD31单克隆抗体免疫组化染色法检测心肌血管密度。 结果:实验组与对照组相比,包括EF、LVEDD、LVESD等在内的各项心功能指标均有改善。在移植后,实验组血清ET水平下降明显。而对照组无明显变化。移植后,实验组血清VEGF水平上升明显,而对照组无明显变化。H.E.染色及CD31单抗免疫组化提示:实验组与对照组相比,血管密度有明显上升。 结论:(1)我们采用经猪冠状动脉注射明胶海绵栓子的方法,建立缺血性心脏病—心肌梗塞模型,稳定可靠,重复性好,接近临床病理生理
祝晓[9]2008年在《GCA-HIF-1α-GCC提高移植骨髓干细胞存活率及治疗缺血性心肌病的实验研究》文中认为背景:近年来,随着干细胞工程的兴起,骨髓间充质干细胞在治疗缺血性心脏病方面备受关注。研究表明,干细胞可以分化为心肌细胞、增加有功能的心肌细胞数量,增加心梗区域血管的密度,改善心功能,干细胞的存活依赖于所种植的微环境,移植到缺血心肌的干细胞存活率极低,严重制约了其疗效。实验证实低氧诱导因子-1α( hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)能明显抑制细胞的凋亡,虽然缺氧心肌能够产生HIF-1α,但由于降解极快,难以在心肌缺血缺氧中发挥作用。因此我们运用双定点基因突变的方法重组HIF-1α,转染干细胞,研究在体内外的缺氧条件下,基因突变的HIF-1α能否抑制干细胞的凋亡,提高治疗效果,并在此基础上进一步探讨干细胞自体移植联合基因转染治疗缺血性心肌病的机理。第一部分猪骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离、培养和心梗模型的建立目的:从猪的骨髓中分离出具有多向分化潜能的骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)以及建立猪的心梗动物动物模型。第一节猪骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离、培养目的:建立猪骨髓间充质干细胞体外培养方法,为细胞心肌成形术提供新材料。方法:猪的骨髓MSCs分离纯化后,流式细胞仪检测细胞周期。结果:体外培养的原代MSCs 10～14d达到融合,细胞周期显示73%的细胞处于G0/G1期。结论:根据黏附特性分离的猪骨髓MSCs在体外条件下可生长扩增,可用于细胞心肌成形术。第二节猪心肌梗死模型的建立目的:经心导管用明胶海绵栓子栓塞猪的冠状动脉左前降支(LAD),建立心肌梗死的模型。方法:麻醉后经股动脉置入心导管至冠状动脉左前降支远端用明胶海绵栓塞LAD。8周后行血流动力学、核磁共振、冠状动脉造影及组织学检查。结果:与对照组相比,心梗(MI)组左室发展压(LVDP)降低(P<0.05),±dp/dtmax下降(P<0.05)。与对照组相比,心梗(MI)组左室每搏量(SV)、舒张末期室壁厚度(EDWT)下降(P<0.05)。复查冠脉造影提示LAD栓塞仍存在。组织学检查MI组前室壁、室间隔形成了透壁梗死灶。结论:运用明胶海绵封堵冠状动脉成功建立猪心肌梗死模型,符合临床病理生理过程,稳定可靠。第二部分pcDNA3.1+-GCA-HIF-1α-GCC慢病毒表达载体构建目的:构建低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α的突变体pcDNA3.1+-GCA-HIF-1α-GCC,并用慢病毒包装。方法:用定点突变的方法将pcDNA3.1+-HIF1α的HIF1α第567位脯氨酸HIF1αPro密码子CCA突变为丙氨酸(Ala)密码子GCA,构建成单个突变HIF1α真核表达载体pcDNA3.1+HIF1α-567Ala在第一次突变的基础上仍然用定点突变的方法将pcDNA3.1+- HIF1α-567Ala的第811位天冬酰胺(Asn)密码子AAT突变为丙氨酸(Ala)密码子GCC,构建成双定点突变HIF1α真核表达载体pcDNA3.1+-GCA-HIF-1α-GCC,重组成HIF1α慢病毒质粒,经酶切及测序鉴定正确后,在293细胞中包装成为重组HIF1α慢病毒,并进行PCR鉴定及滴度测定,以RT-PCR和Western blot法分别对转染细胞进行表达分析。结果:经酶切鉴定及基因测序证实人双突变型低氧诱导因子1α真核表达载体GCA-HIF-1α-GCC构建成功,PCR检测重组慢病毒包装成功,病毒滴度为2.5×108tu /ml。结论:成功构建慢病毒包装重组人双突变型低氧诱导因子1α真核表达载体GCA-HIF-1α-GCC,能稳定表达相应的蛋白和HIF-1αmRNA。第叁部分慢病毒系统介导的GCA-HIF-1α-GCC基因转染猪骨髓干细胞及凋亡检测目的:观察慢病毒包装系统(pPACKH1-Lentivector Packaging Kit)介导的GCA-HIF-1α-GCC基因转染猪MSCs,细胞内GCA-HIF-1α-GCC表达情况以及对MSCs生长的影响,在低氧的环境中检测转GCA-HIF-1α-GCC基因的骨髓干细胞和原代细胞、转慢病毒空载体细胞的凋亡情况。方法:取生长良好的第2代MSCs接种,培养至生长汇合70-80%时,加入慢病毒载体GCA-HIF-1α-GCC,设定转染复数(multiplicities of infection,MOI )为5,以只含GFP基因的空质粒进行对照。荧光显微镜观察绿色荧光。提取蛋白后进行western blot蛋白鉴定。用FITC- Annexin V和PI双染法行流式细胞仪分析比较MSCs凋亡,转慢病毒空载体的MSCs和转GCA-HIF-1α-GCC的MSCs叁种细胞在1% O2 37℃的培养箱中培养24 h后细胞的凋亡和死亡情况。Western blot检测Bax、HO-1蛋白表达。结果:转染MSCs 48小时后,可检测到强荧光出现。Western blot免疫印迹技术表明HIF-1α蛋白表达产物的分子量与已知分子量相符。原代细胞在缺氧和乏营养状态下发生大量的凋亡,其凋亡率为61.3%,转空载体的细胞死亡率达67.3%,而转GCA-HIF-1α-GCC基因的MSC的凋亡率仅为7.1%。Western blot表明转基因的MSCs,HO-1蛋白表达增高而Bax表达降低。结论:使用携带目的基因GCA-HIF-1α-GCC的慢病毒系统转染猪的骨髓干细胞可使其稳定表达HIF-1α。转GCA-HIF-1α-GCC的MSCs在体外较MSCs更能耐受缺氧和乏营养所诱发的凋亡,其原因与HIF-1α稳定表达促使干细胞分泌HO-1抑制Bax有关。第四部分GCA-HIF-1α-GCC修饰自体骨髓干细胞移植治疗缺血性心肌病的实验研究目的:探讨转染GCA-HIF-1α-GCC基因的MSCs自体移植治疗缺血性心肌病的疗效及机理,为治疗缺血性心肌病提供新的方法。方法:选用15～20㎏梅山小型猪24头,随机分4组:A组:空白组、B组:DMEM组、C组:MSCs组和D组:转基因组,应用明胶海绵栓塞LAD建立心梗模型。采用密度梯度离心与贴壁筛选相结合的方法分离纯化、体外扩增MSCs,D组MSCs体外转染GCA-HIF-1α-GCC基因。干细胞(1×107/5 mL)经心导管注射到LAD栓塞处远端。分别于MSCs注射1周、2周、4周、6周和8周,行Powerlab及MRI检查,评估心功能和活体内干细胞标记情况,采用ELISA法检测血浆BNP、VEGF在梗死后和干细胞移植前后的变化;组织学观察各组移植细胞的情况,测算心梗面积,以及Western blot检测过氧化酶体增殖物激活型受体α(peroxisomeproliferator activated receptorα, PPARα)。结果:移植前,磁共振示梗死心脏的左室舒张末径(EDWT)增加,每搏量(SV)明显下降,血流动力学LVDP、±dp/dtmax下降明显。移植后,C、D组的心功能较移植前有改善(P<0.05),移植的MSCs能防止梗塞区变薄和扩张;与A、B两组和移植前相比,梗死区的收缩功能和血流灌注均有所改善(P<0.05),移植组的心梗面积缩小(P<0.05);这种心功能的改善在D组更为明显(与C组比较,P<0.05)。Western blot检测PPAR,与A、B和C组相比, D组PPARα蛋白表达明显增加(P<0.05)。D组的增加比C组显着。与A、B两组相比,C、D组梗死区的毛细血管密度明显增加(P<0.05),D组的增加比C组显着,同样比较,BNP降低明显(P<0.05),D组的降低比C组显着。C、D组VEGF的水平在梗死后有所增加,在细胞移植后一周出现高峰,后逐渐下降。结论:MSCs能在宿主心肌组织中存活,通过防止梗死区变薄、抑制收缩功能异常而改善左室功能。GCA-HIF-1α-GCC转染MSCs可以使移植的干细胞更能耐受移植早期的缺氧和乏营养的微环境,减少细胞的凋亡,增加参与心肌修复的干细胞的绝对数量,从而可更加显着改善心脏功能,PPAR在其中起非常重要的作用。应用GCA-HIF-1α-GCC基因和MSCs自体移植是治疗缺血性心肌病的一种有效的方法。
黄盛东, 刘晓红, 袁扬, 龚德军, 徐志云[10]2007年在《携带血管生成素的骨髓基质干细胞移植对缺血性心脏病治疗的实验研究》文中研究说明目的：评价转染血管生成素基因的自体骨髓间充质干细胞移植治疗慢性缺血性心脏病的疗效。方法：腺病毒介导的血管生成素基因转染自体骨髓基质干细胞并移植于置 Ameriod 的猪慢性心肌缺血模型上, 通过冠状动脉造影、心脏彩超、核磁心肌灌注成像、病理学观察等评价治疗效果。结果：置环后的动物均为有效的动物模型。转染血管生成素的骨髓基质干细胞移植后侧支血管增生明显,血管
参考文献：
[1]. 5-氮胞苷体外诱导人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究[D]. 王利霞. 郑州大学. 2005
[2]. 骨髓间充质干细胞移植对猪缺血心肌影响的实验观察[D]. 从长伟. 郑州大学. 2007
[3]. 干细胞移植治疗缺血性心脏病:临床应用的可行性与安全性[J]. 胡雅光. 中国组织工程研究. 2013
[4]. 自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死疗效评估及活体示踪研究[D]. 马翔. 新疆医科大学. 2007
[5]. 自体骨髓干细胞移植治疗缺血性心脏病的实验研究[D]. 王燕. 山东大学. 2004
[6]. 骨髓干细胞治疗阿霉素诱导的扩张型心肌病的实验研究[D]. 宋嘉. 天津医科大学. 2005
[7]. 自体骨髓单个核细胞移植治疗冠心病陈旧心梗的临床研究[D]. 刘盛. 中国协和医科大学. 2008
[8]. 自体骨髓间充质干细胞移植对缺血心肌血管再生影响的实验研究[D]. 李科. 苏州大学. 2005
[9]. GCA-HIF-1α-GCC提高移植骨髓干细胞存活率及治疗缺血性心肌病的实验研究[D]. 祝晓. 苏州大学. 2008
[10]. 携带血管生成素的骨髓基质干细胞移植对缺血性心脏病治疗的实验研究[C]. 黄盛东, 刘晓红, 袁扬, 龚德军, 徐志云. 中华医学会第七次全国胸心血管外科学术会议暨2007中华医学会胸心血管外科青年医师论坛论文集心血管外科分册. 2007
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