导读:本文包含了四环素调控论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:四环,基因,细胞,病毒,尿激酶,白蛋白,膀胱癌。
四环素调控论文文献综述
张晟,黎海燕,廉梅,刘宇,肖东[1]（2019）在《基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体》一文中研究指出基于四环素调控系统构建白蛋白(albumin,Alb)启动子调控大鼠uPA(urokinase-type plasminogen activator,ruPA)转基因肝特异性过表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG)。以CTG0875-2-11质粒为模板,PCR扩增大鼠的uPA(ruPA)基因,3'端添加Flag标签,In-Fusion克隆至pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG)质粒中,得到慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG),所构建质粒经测序和酶切鉴定。将pLATTRUTG瞬时转染293T细胞,转染后24 h倒置荧光显微镜检测CopGFP表达;接着向6孔细胞培养板内加入强力霉素(Doxycycline,Dox),48 h后在倒置荧光显微镜下观察CopGFP表达(包括未加Dox的孔),随后收集细胞以提取总RNA和总蛋白,用于RT-qPCR检测ruPA及报告基因表达和Western blot检测标签蛋白Flag表达。酶切和测序确证我们成功构建了慢病毒载体pLATTRUTG;瞬转293T细胞后,24 h倒置荧光显微镜下可见零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光,加Dox 48 h后所有细胞展现强的绿色荧光,而不加Dox的孔内仍然只见到零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,与不加Dox的细胞相比,加Dox的细胞中ruPA、报告基因CopGFP和Flag表达水平显着升高。结果提示,成功基于四环素调控系统构建Alb启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体pLATTRUTG,为相关后续实验奠定了基础。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年08期）
张航[2]（2018）在《四环素调控CGRP基因表达的腺相关病毒的构建及鉴定》一文中研究指出目的:构建含有四环素(Tetracycline,Tet)诱导调控降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达的重组腺相关病毒质粒,并包装9型重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated viral vector9,rAAV9),将其体外转染原代心肌细胞,观察重组腺相关病毒介导CGRP基因在原代心肌细胞中的表达。方法:1.pAAV-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒质粒的构建以pAAV-TRE-CMV-tTS/rtTA为模版,PCR扩增并插入双酶切(Ba-mHI、ApaLI)和引入Myc尾的CGRP-Myc片段,再将双酶切后的片段连接构成重组腺相关病毒质粒pAAV-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA。2.rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒的包装与鉴定将pAAV-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒质粒与pAA-V9包装质粒、辅助质粒pHelper共同转染HEK293细胞,获得rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒。用SDS-PAGE测定病毒纯度和q-PCR法测定病毒滴度。3.rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒表达的检测将重组腺相关病毒rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA体外转染乳鼠原代心肌细胞,并在细胞培养液中加入Dox诱导CGRP表达,提取mRNA和蛋白质,用RT-PCR法和WesternBlot法测定CGRP基因的表达水平。结果:1.成功构建pAAV-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒质粒。2.成功包装rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒,病毒滴度为 1.87×1012GC/mL。3.rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒成功转染原代心肌细胞,并在Dox诱导下介导CGRP基因高表达。结论:成功构建pAAV-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒质粒,并包装和鉴定rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒。rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒成功转染原代心肌细胞并在Dox诱导下介导CGRP基因高表达。(本文来源于《湖南师范大学》期刊2018-06-01）
温雅雯[3]（2018）在《鸭疫里默氏杆菌四环素耐药基因M949_RS06330单克隆抗体的制备及调控研究》一文中研究指出近年来,由于抗生素的滥用,导致鸭疫里默氏杆菌的四环素耐药株逐渐增多,而目前对于鸭疫里默氏杆菌四环素耐药性的研究多偏向于药敏实验或流行性分析,对鸭疫里默氏杆菌四环素耐药基因和耐药机制鲜有报道。通过比较基因组及生物信息学分析发现鸭疫里默氏杆菌血清1型野生株CH3基因组中含有一个编码RND家族外排泵基因M949_RS06330,其上游序列存在一个四环素阻遏蛋白Tet R蛋白(M949_RS06320)以及I型分泌系统TolC家族蛋白(M949_RS06325)。因此推断这叁个基因组成了一个与四环素耐药相关的功能区。本研究利用生物信息学软件对M949_RS06330进行了基因分析及相关调控研究;借助大肠杆菌原核表达系统及单克隆抗体技术,对M949_RS06330进行了原核表达并制备了其单克隆抗体;以四环素类药物中的四环素及替加环素为代表,通过荧光定量PCR及Western Blot技术,探究了四环素类药物对M949_RS06330以及M949_RS06320、M949_RS06325基因表达的影响。1.M949_RS06330的生物信息学分析检索GenBank数据库中已公布的鸭疫里默氏杆菌基因组序列,进行M949_RS06330同源蛋白多重序列比对和进化树分析。结果表明,M949_RS06330与黄杆菌(Flavobacteriaceae bacterium)、金黄杆菌(Chryseobacterium)等同源蛋白亲缘关系较近,与鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium mizutaii)、乳酸乳杆菌(Sphingobacterium lactis)等同源蛋白亲缘关系较远;现有公开发表的31株鸭疫里默氏杆菌全基因组序列中,仅在2型(RA-CH-2、RA Yb2、RA-GD、RA DSM 15868、RA-YM)及1型(RA-CH-1、CH3)鸭疫里默氏杆菌基因组中比对到M949_RS06330同源蛋白;针对本实验室从全国各地规模化鸭场收集的鸭疫里默氏杆菌进行M949_RS06330同源基因调查,发现有16株具有该基因,经测序比对和进化树分析发现,M949_RS06330在2型及15型血清型的菌株中有较好的保守性,但在血清1型中差别较为明显,可分为两支。综合以上分析,可以推断M949_RS06330可能并不是鸭疫里默氏杆菌固有结构基因,而是在长期进化过程中所获得的外源基因。2.M949_RS06330的原核表达及其单克隆抗体的制备将基因M949_RS06330全长序列插入pET28a载体中,构建pET28a-M949_RS06330重组质粒,并转化到感受态宿主菌BL21(DE3)中,加入异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)37℃小量诱导表达6h,进行SDS-PAGE检测,结果获得预期大小的M949_RS06330重组蛋白。将M949_RS06330重组蛋白大量表达,SDS-PAGE分析结果显示,蛋白主要表达在上清。上清蛋白纯化后,作为免疫原等体积包裹弗氏完全佐剂,注射8周龄BALB/C小鼠,经过叁次免疫和效价检测,选取效价最高的小鼠超免,超免后取该小鼠的脾细胞与SP2/0杂交瘤细胞融合。叁次亚克隆后筛选出一株分泌特异性抗体的单克隆细胞株1E11。然后制备腹水以大量生产该单克隆抗体。1E11单抗亚型鉴定表明该单克隆抗体轻链为k,重链为IgG2b;ELISA检测该单抗效价达到1:2048000;Western blot检测该单抗特异性,结果显示该单抗特异性良好。3.四环素类药物对M949_RS06330调控作用研究在培养基中分别添加0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL的替加环素和四环素,以不加任何药物的CH3菌液作为空白对照。设计M949_RS06320、M949_RS06325和M949_RS06330的q-RT PCR特异性引物,以鸭疫里默氏杆菌16srRNA为内参基因,采用荧光定量PCR方法检测不同浓度梯度的替加环素和四环素对M949_RS06320、M949_RS06325和M949_RS06330 mRNA表达的影响。按照2~((-ΔΔCt))相对定量PCR法计算分析结果,用GraphPad Prism 5软件作图。结果表明:替加环素、四环素对这叁种基因mRNA水平呈现明显诱导作用;利用制备的M949_RS06330单抗,Western blot检测不同浓度的替加环素和四环素对M949_RS06330蛋白表达的影响,结果表明替加环素和四环素对M949_RS06330蛋白有明显诱导作用,与荧光定量PCR结果一致。(本文来源于《安徽农业大学》期刊2018-06-01）
徐秀举[4]（2018）在《四环素调控的重组酵母细胞的构建及对猪尿中四环素类残留的筛检研究》一文中研究指出目的:构建四环素反应元件(Tetracycline Response Element,TRE)调控的重组基因酵母细胞,用于快速检测动物食品中四环素类抗生素的残留。方法:1.用PCR方法从酵母DNA提取液中扩增GPD(3-磷酸甘油醛脱氢酶,Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydro-genase)基因启动子,将其插入到酵母表达载体pYESTrp2,从而构建GPD 启动子驱动的酵母表达载体pGPD。2.人工合成双股V5抗原表位DNA,将其插入pGPD载体;以质粒pcDNA6/TR为模板,PCR扩增四环素阻逆蛋白(Tetracycline Repressor Protein,tetR)基因,并与pGPD载体的V5抗原表位DNA相融合,构建成GPD驱动的TR酵母表达载体,并转化于酵母细胞W303-1A,用Western blot方法鉴定tetR基因的表达。3.人工合成四环素反应元件(Tetracycline Response Element,TRE),将其插入pMP206酵母报告载体的CYC1启动子与报告基因Lac Z(β-半乳糖苷酶基因)之间,构建成TRE调控的Lac Z酵母报告载体pyTeton-Lac Z。4.以pYESTrp2载体为模板,PCR扩增GAL1(半乳糖诱导型启动子基因)启动子,取代pyTeton-Lac Z载体上的CYC1(细胞色素氧化基因)启动子,构建成GAL1驱动TRE调控的Lac Z酵母报告载体,并转化于可高效表达TR的酵母细胞中,对阳性克隆用四环素进行诱导,分析其灵敏度和特异度。5.从扬州市某养猪场收集146例猪尿样本,以ELISA方法作为金标准,用重组酵母细胞方法对其尿液中四环素类抗生素进行检测,与金标准方法进行比较分析研究。结果:1.经PCR鉴定发现GPD启动子、tetR基因已成功转化于W303-1A酵母细胞,片段大小与预期的基因片段大小一致;用Western blot方法分析,tetR基因已成功在酵母细胞中表达,蛋白大小为22KD。2.经PCR鉴定发现GAL1驱动的TRE调控的重组Lac Z酵母细胞构建成功;所构建的四环素调控的重组酵母细胞与四环素类抗生素有明显的剂量效应关系,而与非四环素类抗生素无剂量效应关系,说明有良好的灵敏性和特异性。3.重组酵母方法与ELISA方法比较发现,两种方法测定的阳性率有统计学差异(χ2=22.56,P=1.881×10-6<0.01)。经ROC曲线分析,发现重组酵母方法的灵敏度为76.36%,但是,其特异度和符合率不高,分别为43.96%和56.16%;约登指数为0.203,阳性似然比(+LR)为1.363,阴性似然比(-LR)为0.538,阳性预测值为45.16%,阴性预测值为75.47%;重组酵母方法与ELISA法均可发现混合四环类抗生素之间的联合效应,但是,重组酵母对四环类抗生素混合物联合作用相对较敏感。结论:所构建的重组酵母细胞(W303-1A/TR-GAL1-Teton-Lac Z)对四环类抗生素混合物联合效应较敏感,对家畜尿液中四环类抗生素残留有一定程度的快速筛检作用,但是,其特异度和灵敏度还需进一步研究提高。(本文来源于《扬州大学》期刊2018-04-05）
李鸿茹,涂洵崴,翁丽红,陈愉生[5]（2018）在《四环素调控livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响》一文中研究指出目的:探讨四环素调控(Tet-on)livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响,以期寻找更优的肺癌干预调控系统。方法:构建Tet-on livin shRNA慢病毒载体,在裸鼠右上肢背部皮下注射肺腺癌A549株细胞建立肺癌裸鼠皮下移植瘤模型,以Tet-on livin shRNA慢病毒载体注射瘤体干预livin表达,并以四环素腹腔注射诱导处理,了解Tet-on调控livin RNA干扰效果并观察其抑制肺癌细胞增殖情况。结果:经四环素诱导,Tet-on livin RNA组移植瘤组织中livin蛋白表达明显低于CTL组及Tet-onNC组,且Tet-on-livin RNA组瘤体质量明显低于CTL组及Tet-on-NC组[(5.31±0.86)vs(8.22±0.63)、(7.17±0.54)g,P<0.05];提示该调控系统可显着下调livin的表达,并抑制肺癌皮下移植瘤的生长,且该调控系统毒副作用小,未发现裸鼠死亡。结论:Tet-on livin RNA干扰系统在四环素诱导下可抑制肺癌生长,具有靶向性、可调控的特点,为以livin蛋白为靶点的肺癌靶向治疗研究提供重要的研究工具。(本文来源于《中国肿瘤生物治疗杂志》期刊2018年03期）
尚冰清,周丹,朱宏,刘昱,郭丽丽[6]（2018）在《hsp90α基因四环素诱导调控表达质粒的构建及功能验证》一文中研究指出目的构建Hsp90α基因的单质粒四环素/强力霉素诱导表达系统,并验证其不同表达量对Hep G2肝癌细胞增殖的影响。方法通过PCR,分别从p Retro X-Tet-On Advanced质粒和pc DNA3.1-EGFP质粒中扩增rt TA表达盒和EGFP基因,依次将rt TA和EGFP基因克隆入p TRE-Tight载体中,p Retro X-Tight载体中,获得EGFP标记的Tet-on单质粒系统。基于本系统,构建DOX诱导的Hsp90α表达质粒p Retro X-Hsp90α-EGFPTet-On,然后采用脂质体转染Hep G2细胞,以不同浓度(0,100,500,2500 ng/m L)的DOX诱导,通过荧光显微镜、荧光定量PCR以及Western blot检测EGFP和目的蛋白Hsp90α的表达。结果转染质粒载体后的Hep G2细胞经不同浓度的DOX 24 h后,RT-PCR和Western blot结果显示一致,随着DOX浓度的增大,Hsp90α基因表达量逐渐增加,DOX 500 ng/m L时时,基因表达的水平达到高峰;加入DOX 48 h后,细胞的增殖明显高于对照组,且存在剂量依赖性。结论该研究成功地应用四环素基因表达调控系统调控了Hsp90α基因在HepG2细胞内表达及促肿瘤细胞增殖的功能,为进一步探讨Hsp90α基因与肿瘤的增殖和侵袭之间的关系提供理论基础。(本文来源于《中西医结合心血管病电子杂志》期刊2018年08期）
幸雪冰,吕国诚,廖立兵,梅乐夫[7]（2016）在《制备可调控电磁性能的MnO_2矿物以及在微波条件下对四环素的降解研究》一文中研究指出作为一种性能优良的微波吸收材料,二氧化锰矿物(MOs)能够作为一种催化剂增强对有机化合物的降解[1]。在研究中,我们通过控制不同价态的Mn(II/III/IV)在水钠锰矿中的含量,提高水钠锰矿作为催化剂在微波作用下对四环素的降解作用。通过XRD、EXFS、ESEM、XPS等测试手段,不同价态Mn(II/III/IV)含量存在差异导致合成的水钠锰矿的物理、化学性能也不完全相同[2,3]。对比不同比例Mn(II/III/IV)的水钠锰矿对四环素的降解效果,在结构中低价Mn(II/III)越多的锰矿物越有利于对四环素的降解。四环素的降解是通过LC/MS分析其产物性质来证明的[4]。水钠锰矿作为催化剂在微波条件下对四环素的降解作用来源于结构中Mn(II/III)的高自旋磁矩对微波的响应以及微波环境加快了Mn的氧化过程[5,6]。(本文来源于《2016年全国矿物科学与工程学术研讨会摘要集》期刊2016-10-21）
牟丽莎,朱书,蔡志明[8]（2016）在《靶向长链非编码RNA TUC338的人工合成四环素调控系统在膀胱癌细胞中的作用》一文中研究指出目的:探讨应用四环素调控长链非编码RNA TUC338在膀胱癌细胞内的表达及抗肿瘤作用。方法:将针对TUC338的sh RNA序列插入到四环素诱导系统的下端,构建四环素诱导的TUC338 sh RNA并转染细胞。应用实时荧光定量PCR检测细胞内TUC338的表达水平,采用CCK8和半胱天冬酶3酶联免疫吸附测定法的方法分别检测细胞的增殖和凋亡。结果:四环素诱导的TUC338 sh RNA可以降低TUC338的表达,抑制膀胱癌细胞增殖和促进膀胱癌细胞的凋亡。结论:通过构建四环素基因表达调控系统,可精确控制TUC338在膀胱癌细胞内表达,并发挥杀伤肿瘤细胞功能,为进一步构建特异、高效的膀胱癌合成生物治疗器件提供理论基础。(本文来源于《深圳中西医结合杂志》期刊2016年19期）
宋珂,陈美玲,石琦,青莹,曹颖光[9]（2015）在《四环素调控的介导bFGF重组腺相关病毒的构建及体外实验》一文中研究指出目的:制备携带碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的病毒载体,能被四环素调控表达。方法:构建重组质粒pAAV-S3-bFGF,生产重组病毒rAAV2-tet-off-bFGF,并感染小鼠颅骨前成骨细胞MC3T3-E1,实时定量PCR检测强力霉素(doxycycline,Dox)调控下rAAV2-tet-off-bFGF对MC3T3-E1中成骨相关因子的影响。结果:生产出高滴度及纯度的重组病毒rAAV2-tet-off-bFGF,能被Dox调控,感染MC3T3-E1后能促进胞内成骨相关因子的表达升高。结论:这种重组病毒rAAV2-tet-off-bFGF能在Dox调控下有效传递外源基因,为骨组织工程中的种子细胞提供基因传递载体。(本文来源于《口腔医学研究》期刊2015年09期）
张娟[10]（2015）在《四环素调控人Numb基因过表达慢病毒载体的分步构建》一文中研究指出目的:本课题旨在构建含有四环素调控人Numb基因过表达调控组份的Lenti-EF1a-RTTA-IRES-Puro慢病毒载体,以及构建含有四环素调控人Numb基因过表达反应组份的Lenti-EF1a-EGFP-TRE-Numb慢病毒载体,并测定它们的滴度,为Numb调控人干细胞“干性”的研究提供实验基础。方法:1、采用酶切技术将Lenti-egfp-IRES-puro载体酶切后获得Lenti-IRES-puro骨架。采用凝胶电泳技术验证rtta基因片段。将rtta基因片段连接到Lenti-IRES-puro骨架上得到Lenti-EF1a-RTTA-IRES-Puro重组质粒。将重组质粒转入到感受态大肠杆菌中进行质粒的扩增,提取质粒通过酶切及基因测序验证后,将Lenti-EF1a-RTTA-IRES-Puro重组质粒、辅助包装质粒delta、pVSVG共转染293T细胞,分别在转染后48小时和72小时收集病毒及浓缩病毒。将病毒稀释后感染293T细胞,48小时后,通过ELISA方法测定其滴度。2、使用酶切技术将Lenti-EF1a-EGFP-TRE-OCT4载体酶切后获得Lenti-EF1a-EGFP-TRE骨架。使用RT-PCR技术从人胚胎干细胞总RNA中获得人Numb基因片段,将人Numb基因片段连接到Lenti-EF1a-EGFP-TRE骨架上得到Lenti-EF1a-EGFP-TRE-Numb重组质粒。将重组质粒转入到感受态大肠杆菌中进行质粒的扩增,提取质粒通过酶切及基因测序验证后,将Lenti-EF1a-EGFP-TRE-Numb重组质粒、辅助包装质粒delta、pVSVG共转染293T细胞,分别在转染后48小时和72小时收集病毒及浓缩病毒。将病毒稀释后感染293T细胞,48小时后,通过DAPI细胞染色方法测定其滴度。结果:1、Lenti-egfp-IRES-puro载体经酶切行琼脂糖凝胶电泳后,观察到有两条条带,显示Lenti-IRES-puro骨架获取成功。rtta基因片段行琼脂糖凝胶电泳后,观察到在1kbp附近有条带,显示rtta基因片段获取成功。克隆的Lenti-EF1a-RTTA-IRES-Puro重组质粒经酶切行琼脂糖凝胶电泳,观察到有两条条带,经基因测序结果为100%正确,显示Lenti-EF1a-RTTA-IRES-Puro重组质粒构建成功。重组质粒与辅助包装质粒共转染293T细胞,感染后48小时收集的Lenti-EF1a-RTTA-IRES-Puro病毒浓缩液滴度为:6.5*10^7TU/ml,感染后72小时收集的Lenti-EF1a-RTTA-IRES-Puro病毒浓缩液滴度为:5.7*10^7TU/ml。2、Lenti-EF1a-EGFP-TRE-OCT4载体经酶切后行琼脂糖凝胶电泳,观察到有两条条带,显示Lenti-EF1a-EGFP-TRE骨架获取成功。采用RT-PCR技术从人胚胎干细胞总RNA中获取人Numb基因片段行琼脂糖凝胶电泳后,观察到在2kbp处有条带,显示人Numb基因片段获取成功。克隆的Lenti-EF1a-EGFP-TRE-Numb重组质粒经酶切后行琼脂糖凝胶电泳,观察到有两条条带,经基因测序结果为100%正确,显示Lenti-EF1a-EGFP-TRE-Numb重组质粒构建成功。重组质粒与辅助包装质粒共转染293T细胞,感染后48小时收集的Lenti-EF1a-EGFP-TRE-Numb病毒浓缩液滴度为:3.5*10^7TU/ml,感染后72小时后收集的LentiEF1a-EGFP-TRE-Numb病毒浓缩液滴度为:2.5*10^7TU/ml。结论:1、含有四环素调控人Numb基因过表达调控组份的Lenti-EF1a-RTTA-IRE S-Puro慢病毒载体构建成功。2、含有四环素调控人Numb基因过表达反应组份的Lenti-EF1a-EGFP-TRENumb慢病毒载体构建成功。(本文来源于《南昌大学》期刊2015-05-29）
四环素调控论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建含有四环素(Tetracycline,Tet)诱导调控降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达的重组腺相关病毒质粒,并包装9型重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated viral vector9,rAAV9),将其体外转染原代心肌细胞,观察重组腺相关病毒介导CGRP基因在原代心肌细胞中的表达。方法:1.pAAV-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒质粒的构建以pAAV-TRE-CMV-tTS/rtTA为模版,PCR扩增并插入双酶切(Ba-mHI、ApaLI)和引入Myc尾的CGRP-Myc片段,再将双酶切后的片段连接构成重组腺相关病毒质粒pAAV-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA。2.rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒的包装与鉴定将pAAV-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒质粒与pAA-V9包装质粒、辅助质粒pHelper共同转染HEK293细胞,获得rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒。用SDS-PAGE测定病毒纯度和q-PCR法测定病毒滴度。3.rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒表达的检测将重组腺相关病毒rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA体外转染乳鼠原代心肌细胞,并在细胞培养液中加入Dox诱导CGRP表达,提取mRNA和蛋白质,用RT-PCR法和WesternBlot法测定CGRP基因的表达水平。结果:1.成功构建pAAV-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒质粒。2.成功包装rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒,病毒滴度为 1.87×1012GC/mL。3.rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒成功转染原代心肌细胞,并在Dox诱导下介导CGRP基因高表达。结论:成功构建pAAV-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒质粒,并包装和鉴定rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒。rAAV9-TRE-CGRP-Myc-tTS/rtTA重组腺相关病毒成功转染原代心肌细胞并在Dox诱导下介导CGRP基因高表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
四环素调控论文参考文献
[1].张晟,黎海燕,廉梅,刘宇,肖东.基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体[J].动物医学进展.2019
[2].张航.四环素调控CGRP基因表达的腺相关病毒的构建及鉴定[D].湖南师范大学.2018
[3].温雅雯.鸭疫里默氏杆菌四环素耐药基因M949_RS06330单克隆抗体的制备及调控研究[D].安徽农业大学.2018
[4].徐秀举.四环素调控的重组酵母细胞的构建及对猪尿中四环素类残留的筛检研究[D].扬州大学.2018
[5].李鸿茹,涂洵崴,翁丽红,陈愉生.四环素调控livinRNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响[J].中国肿瘤生物治疗杂志.2018
[6].尚冰清,周丹,朱宏,刘昱,郭丽丽.hsp90α基因四环素诱导调控表达质粒的构建及功能验证[J].中西医结合心血管病电子杂志.2018
[7].幸雪冰,吕国诚,廖立兵,梅乐夫.制备可调控电磁性能的MnO_2矿物以及在微波条件下对四环素的降解研究[C].2016年全国矿物科学与工程学术研讨会摘要集.2016
[8].牟丽莎,朱书,蔡志明.靶向长链非编码RNATUC338的人工合成四环素调控系统在膀胱癌细胞中的作用[J].深圳中西医结合杂志.2016
[9].宋珂,陈美玲,石琦,青莹,曹颖光.四环素调控的介导bFGF重组腺相关病毒的构建及体外实验[J].口腔医学研究.2015
[10].张娟.四环素调控人Numb基因过表达慢病毒载体的分步构建[D].南昌大学.2015
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