人脂肪间充质干细胞向限定性内胚层细胞分化体系的优化

人脂肪间充质干细胞向限定性内胚层细胞分化体系的优化

论文摘要

目的探讨activin A、WNT通路激活剂、BMP4以及bFGF信号对人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向限定性内胚层(DE)分化的影响。方法基于胚胎干细胞(ESCs)或多潜能干细胞(iPS)向DE分化的诱导体系,建立并优化hADSCs向DE细胞分化的诱导体系。在hADSCs向DE诱导体系中,分别比较不同浓度的activin A、Chir99021替代Wnt3a、添加/去除bFGF以及BMP4等对分化效率的影响。用RT-qPCR检测诱导前后限定性内胚层标志基因FOXA2和SOX17的表达;Western blot检测FOXA2和SOX17蛋白水平;用免疫荧光检测FOXA2和SOX17的表达,鉴定DE分化。结果与ESCs或iPS向DE分化的诱导体系相比,低浓度的activin A,GSK3抑制剂Chir99021替代Wnt3a,去除BMP信号和bFGF信号的诱导方案可以明显促进hADSCs向DE分化的影响(P<0.01)。结论 hADSCs向DE分化与hESC/hiPS相比,需要激活不同信号通路,因此最适诱导体系不同。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 样本:
  •     1.1.2 主要试剂:
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 hADSCs的分离培养:
  •     1.2.2 诱导限定性内胚层细胞:
  •     1.2.3 RT-qPCR检测DE相关基因的表达:
  •     1.2.4 Western blot检测DE相关基因的表达:
  •     1.2.5 免疫荧光检测DE相关基因的表达:
  •   1.3 统计学分析
  • 2 结果
  •   2.1 比较两种诱导方案的明确主要优化目标
  •   2.2 不同浓度的activin A对hADSCs分化为DE的影响
  •   2.3 小分子化合物Chir99021替代Wnt3A对hADSCs分化为DE的影响
  •   2.4 BMP4对hADSCs分化为DE的影响
  •   2.5 bFGF对hADSCs分化为DE的影响
  •   2.6 最适体系诱导hADSCs向DE分化的鉴定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李静,杨岩磊,赵春华

    关键词: 间充质干细胞,限定性内胚层,诱导分化方案

    来源: 基础医学与临床 2019年07期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程中心

    基金: 国家自然科学基金(81370879)

    分类号: R329.2

    DOI: 10.16352/j.issn.1001-6325.2019.07.006

    页码: 954-960

    总页数: 7

    文件大小: 2823K

    下载量: 70

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