花生过敏原Ara h 1蛋白的原核表达及致敏性分析

花生过敏原Ara h 1蛋白的原核表达及致敏性分析

论文摘要

从花生中提取总RNA,用反转录聚合酶链式反应得到花生过敏原Ara h 1基因,构建pET-28a-Ara h 1表达载体,转入Rosetta(DE3)宿主表达菌中诱导产物表达,用镍离子亲和层析法纯化得到目的蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示目的蛋白分子质量约为75 kDa,与预计相符;经质谱鉴定为Ara h 1蛋白。用BALB/c小鼠模型评价重组Ara h 1蛋白的致敏性结果显示,重组Ara h 1蛋白致敏小鼠血清中特异性抗体、Th2型细胞因子、组胺含量升高,空肠和肺组织发生病变,表明重组Ara h 1蛋白可以导致小鼠发生Th2型过敏反应,且有与天然Ara h 1蛋白相似的致敏性。同时RBL细胞模型结果显示重组Ara h 1蛋白还可导致RBL细胞脱颗粒,释放β-己糖苷酶,进一步表明重组Ara h 1蛋白具有致敏性。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 方法
  •     1.3.1 pET-28a-Ara h 1表达载体的构建
  •     1.3.2 Ara h 1蛋白的原核表达
  •     1.3.3 重组Ara h 1蛋白的纯化及鉴定
  •     1.3.4 天然Ara h 1蛋白的纯化
  •     1.3.5 小鼠的致敏流程
  •     1.3.6 小鼠空肠、肺病理切片的观察
  •     1.3.7 血液中特异性抗体与细胞因子含量的测定
  •     1.3.8 RBL-2H3细胞模型对重组Ara h 1蛋白致敏性的评估
  •   1.4 统计学方法
  • 2 结果与分析
  •   2.1 重组Ara h 1蛋白的原核表达
  •     2.1.1 pET-28a-Ara h 1表达载体的构建及测序
  •     2.1.2 重组Ara h 1蛋白的诱导表达与纯化
  •   2.2 重组Ara h 1蛋白的致敏性验证
  •     2.2.1 重组Ara h 1蛋白和天然Ara h 1致敏BALB/c小鼠的血清学分析
  •     2.2.2 重组Ara h 1蛋白致敏BALB/c小鼠的病理学分析
  •     2.2.3 RBL细胞模型对重组Ara h 1蛋白致敏性的评价
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 史云凤,张彤,陈沁

    关键词: 过敏原,重组蛋白,致敏性,小鼠,细胞

    来源: 食品科学 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 上海大学生命科学学院

    基金: 国家自然科学基金青年科学基金项目(31201306)

    分类号: TS201.2

    页码: 121-127

    总页数: 7

    文件大小: 3832K

    下载量: 165

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