导读:本文包含了液相色谱复性论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:色谱,复性,折迭,液相,蛋白,疏水,高效。
液相色谱复性论文文献综述
谭福春,杨毅聪,李维敏,高栋,王骊丽[1]（2015）在《高效液相色谱法复性与纯化重组人Delta-like》一文中研究指出目前,基因工程技术的发展使得多种重组蛋白药物成功地应用于临床治疗,并产生了巨大经济和社会效益。以大肠杆菌(E.coli)系统表达的重组蛋白已有万多种,其中细胞中不溶性的表达,即以包涵体存在形式占到了70-80%。包涵体的复性是获得高活性、高质量重组蛋白药物制备的―瓶颈‖。众所周知,高效液相色谱(HPLC)法具有分离效果好、快速纯化蛋白质、适用性强和易于规模化制备的特点,在包涵体的复性与纯化中也占据了越来越重要的地位。但是,仍然存在的问题是包涵体(本文来源于《第二十届全国色谱学术报告会及仪器展览会论文集（第四分册）》期刊2015-04-19）
贾佳[2]（2010）在《蛋白折迭液相色谱法复性与同时纯化重组人Flt3配体的研究》一文中研究指出近年来,蛋白折迭液相色谱(Protein folding liquid chromatography, PFLC)法越来越多地被应用于包涵体蛋白复性与同时纯化中,PFLC的特点是能在色谱过程将目标蛋白与其它组分分开的同时,还能在色谱柱上进行变性蛋白折迭。本论文①对在大肠杆菌(E.coli)中表达的重组人酪氨酸激酶配体(Recombined human Flt3 ligand, rhFL)进行了摇瓶中菌种培养条件的优化,获得了高表达的rhFL包涵体蛋白；②经超声破碎、离心并多次洗涤沉淀获得纯化的包涵体,并将其溶解于8 mol／L脲中得到变性蛋白的抽提液；③利用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)法,包括一个分析型HPHIC柱、半制备型HPHIC饼和新型单柱二维液相色谱(A novel two-dimensional liquid chromatography using a single column,2DLC-1C)柱进行rhFL包涵体复性与同时纯化的保留特征和复性规律的研究,为大规模制备rhFL蛋白和将其用于临床研究奠定基础。本论文共有四个部分：1.文献综述：对近年来不同机理的PFLC法在蛋白质折迭与同时纯化中的进展和应用,以及FL的结构、生物学功能及临床应用的重要性进行了综述。2.摇瓶中rhFL菌种培养条件的优化：研究了摇瓶中培养基、培养条件(温度、诱导时间、pH、接种量)对rhFL表达的影响。实验结果表明,在培养温度为35℃、选用初始pH值为6.6的SOB培养基、甘油做为碳源、诱导4 h、接种量为4%的条件下,rhFL蛋白的表达量可占菌体总蛋白的47.4%。3. HPHIC法对E.coli表达的rhFL包涵体复性与同时纯化：分别选用不同规格的色谱柱(分析型色谱柱、半制备型色谱饼),通过色谱流动相(小分子添加剂、流速)和进样量对rhFL复性与纯化过程中质量回收率的影响,筛选出rhFL包涵体蛋白在HPHIC柱上复性与纯化的最佳条件和保留规律,初步用荧光光谱法考察了rhFL在色谱柱上复性前后荧光强度变化,并用HPHIC饼对rhFL进行规模化制备。结果分别在固定相配基为苯基的分析型色谱柱、半制备色谱饼上复性与同时纯化rhFL包涵体的质量回收率可达45.9%、67.0%,纯度分别为93.5%、92.1%。对G-CSF依赖株NFS-60的细胞增殖作用的活性结果表明,当与G-CSF协同作用时,平均比活为7.42×108IU／mg。4.新型单柱二维色谱柱对rhFL包涵体复性与同时纯化：新型2DLC-1C柱是在一根色谱柱上兼具有了HIC和IEC两种保留模式,已被用于活性蛋白的快速分离。本工作选用了2DLC-1C柱的HIC模式与和以苯基为配基的HPHIC柱,比较两种色谱柱对rhFL复性与同时纯化过程中流动相的洗脱的盐浓度变化对目标蛋白质量回收率的影响。实验结果显示,在以苯基为配基的色谱柱上,当流动相(NH4)2SO4盐浓度为3.0 mol／L时,rhFL的质量回收率可达到48.7%。而新型的2DLC一1C柱,当流动相为2.0 mol／L(NH4)2SO4时,即可获得的质量回收率为48.5%。从而证实新型填料的2DLC-1C柱在较低盐浓度下可达到较高的质量回收率。此结果也提示这种新型的双保留模式色谱柱,有可能降低规模化制备rhFL蛋白的成本。(本文来源于《西北大学》期刊2010-06-30）
王骊丽,贾佳,王菲,耿信笃[3]（2010）在《新型二维液相色谱柱对重组人FL包涵体的复性与同时纯化》一文中研究指出近年来,蛋白折迭液相色谱(Protein folding liquid chromatography,PFLC)法作为重组包涵体蛋白的一种有效复性与同时纯化工具获得了长足发展。PFLC法主要包括疏水相互作用色谱(HIC)、离子交换色谱(IEC)、尺寸排阻色谱(SEC)和亲和色谱(AFC),其特点是变性的蛋白在色谱柱上复性的同时得到纯化。但是,由于在这四种方法中每步纯化的效果倍差不等,一般需要至少2个纯化步骤才能达到重组蛋白产品的质量标准,即考虑纯度达到95%以上。因此,(本文来源于《全国生物医药色谱学术交流会（2010景德镇）论文集》期刊2010-05-08）
王军[4]（2010）在《单柱二维液相色谱复性变性溶菌酶及胰腺癌血清中肿瘤标志物的制备》一文中研究指出高效液相色谱法是生物大分子分离纯化的手段,也是蛋白复性的有效方法。液相色谱的核心是色谱填料,它在蛋白分离和蛋白折迭液相色谱(PFLC)中起着重大作用。本文主要研究了用单柱二维液相色谱填料分别在弱阳离子交换色谱(WCX)和疏水相互作用色谱(HIC)模式下对还原变性溶菌酶的复性,同时采用离线单柱二维液相色谱对蛋清中的蛋白进行了分离纯化,以及采用SEC-RPLC制备胰腺癌血清中肿瘤标志物。主要包括以下4个部分。1文献综述：主要介绍了二维液相色谱和单柱二维液相色谱的概念及应用,论述蛋白折迭液相色谱法的原理,总结了溶菌酶复性的研究进展及胰腺癌早期诊断的研究进展,其中共引用文献64篇。2首次使用一根色谱柱分别在弱阳离子交换色谱(WCX)和疏水色谱(HIC)两种模式下对还原变性溶菌酶的折迭进行了研究。详细讨论了在两种分离模式下流动相中脲浓度,GSH/GSSG比例,pH,蛋白浓度及流动相流速对还原变性溶菌酶复性效率的影响。结果表明,使用此二维色谱柱,可分别在WCX和HIC模式下实现对还原变性溶菌酶的复性。在WCX模式下复性时,在蛋白浓度高达40 mg／mL的条件下,得到活性回收率和质量回收率分别为94.6%和96.0%,而在HIC模式下,蛋白浓度为5 mg／mL时,相应的活性回收率和质量回收率分别为79.8%和96.1%。表明该二维色谱柱能够应用于蛋白折迭液相色谱,可分别在WCX和HIC模式下对变性蛋白进行折迭。该二维色谱柱有望成为实现蛋白折迭液相色谱法的首选色谱柱。3首次使用一根色谱柱,采用离线单柱二维液相色谱技术对鸡蛋清中的3种蛋白质进行了的分离纯化。第一维采用离子交换色谱模式,可一步分离纯化得到抗生物素蛋白和溶菌酶,其纯度分别达到95.3%和95.6%。将在离子交换模式下不保留的组分再通过疏水色谱模式进行第二维分离,通过条件优化,一步可分离纯化得到球蛋白G2,其纯度可达到98.1%。而卵白蛋白和伴白蛋白则不能够完全分离。结果表明,采用单柱二维液相色谱技术,利用一根色谱柱就可以完成对复杂样品的二维分离和纯化。4采用800 mm×40.0 mm I.D.制备型排阻色谱柱对胰腺癌血清进行了预分离,再经反相色谱进一步分离纯化,得到分子量为5734Da的胰腺癌肿瘤差异蛋白,如将该蛋白进行进一步鉴定,有望成为新的肿瘤标志物。(本文来源于《西北大学》期刊2010-04-01）
王骊丽,耿信笃[5]（2009）在《源于大肠杆菌蛋白的表达、液相色谱复性与纯化新进展》一文中研究指出对近两年来源于大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)的蛋白表达和用蛋白折迭液相色谱(protein folding liquid chrom atography,PFLC)法对所形成的包涵体目标蛋白的复性并同时纯化的新近发展做了简要的介绍和评述.PFLC法用于包涵体蛋白分离、纯化很广,其特点是除了在色谱柱上将目标蛋白与其他组分分开,还同时要在色谱柱上进行包涵体蛋白折迭.可以说,现代生物技术中所用的大多数有价值蛋白产品的制备仍然有赖于不同机理的液相色谱(LC)法.而用PFLC法对源于E.coli的蛋白的制备方法更具可塑性和容易达到规模化,其生成本可以成倍地降低.该文主要内容包括了E.coli蛋白的表达及样品前处理、PFLC的实用范围、PFLC的优化、PFLC中的新技术、新设备和新方法、PFLC的分子学机理、应用事例及对未来的展望.(本文来源于《中国科学(B辑:化学)》期刊2009年08期）
刘振岭,柯从玉,耿信笃[6]（2008）在《脲变性α-糜蛋白酶的高效液相色谱复性》一文中研究指出目的研究变性蛋白质在高效疏水作用色谱(HPHIC)固定相表面上的保留行为及活性回收率。方法用脲将标准蛋白质α-糜蛋白酶(α-Chy)变性,然后以硫酸铵为流动相,用HPHIC固定相(TSK)对脲变性α-Chy进行复性,并测定复性α-Chy的Z值、质量及活性回收率。结果Z值随脲浓度的增大而减小,变性剂浓度在1.0～3.0mol·L-1范围内时,HPHIC对变性α-Chy有较高的活性回收率。结论HPHIC是变性蛋白复性的有效工具,蛋白质与固定相之间的疏水作用是蛋白折迭的主要驱动力。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2008年04期）
王超展,王骊丽,耿信笃[7]（2007）在《蛋白折迭液相色谱法复性和纯化大肠杆菌表达的重组人粒细胞集落刺激因子》一文中研究指出用蛋白折迭液相色谱法(PFLC)对大肠杆菌表达的包涵体形式的重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化。用Cu2+-亚氨基二乙酸(IDA)Sepharose作为固定化金属离子亲和色谱的固定相。在低浓度脲存在下,以咪唑为洗脱剂,采用线性梯度洗脱rhG-CSF。该法仅通过一步PFLC分离,减少了复性过程中rhG-CSF的聚集,复性后的rhG-CSF的比活性为1.8×108IU/mg,纯度为97%,质量回收率为32%。(本文来源于《色谱》期刊2007年04期）
马慧,闫燕,卫引茂,耿信笃[8]（2006）在《β-环糊精在变性溶菌酶液相色谱复性中的协助作用》一文中研究指出变性蛋白复性是生命科学领域内生命起源研究中的重要课题,同时又是基因工程生产中影响生产成本的关键问题。近年来,液相色谱在蛋白质复性的研究中受到了重视。溶菌酶(Lysozyme,Lys), 是研究变性蛋白进行体外再折迭的一个常用目标蛋白。已有研究证明,利用稀释法对蛋白复性时, 在复性缓冲液中添加适量β-环糊精,可在一定程度上抑制肽链分子间聚集,提高复性效率。本实验(本文来源于《首届中国中西部地区色谱学术交流会暨仪器展览会论文集》期刊2006-08-01）
黄亚渝,童卫,郭立安,耿信笃[9]（2005）在《还原变性核糖核酸酶的高效液相色谱复性》一文中研究指出目的:研究还原变性的核糖核酸酶(RNase)在高效疏水作用色谱(HPHIC)及高效离子交换色谱(HPIEC)上的复性及影响因素.方法:在二硫苏糖醇(DTT)存在的条件下用盐酸胍(GuHCl)和尿素(Urea)将RNase变性还原,先在溶液中加入氧化型谷胱苷肽(GSSG)进行氧化,然后在流动相中有低浓度变性剂存在的条件下,用HPHIC,HPIEC及稀释法对其进行复性并测定其生物活性及回收率.结果:HPHIC和HPIEC对RNase的复性效率均高于稀释法,两者的色谱固定相对RNase的复性均有所贡献.在色谱流动相中加入低浓度的变性剂可以提高复性效率,改变GSSG的浓度对复性效率也有影响.结论:用HPHIC,HPIEC对RNase进行复性,不仅复性效率高,而且快速、简便,具有很好的应用前景.(本文来源于《第四军医大学学报》期刊2005年15期）
刘建波[10]（2005）在《重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子发酵工艺和液相色谱法对其复性并同时纯化》一文中研究指出液相色谱(LC)对变性蛋白复性是近年来迅速发展起来的一种新的方法,它能够显着地提高蛋白复性效率,并同时使蛋白得到纯化,目前已成为国际上的研究热点。本论文先对大肠杆菌(E. coli)表达的rhGM-CSF进行了发酵工艺和放大工艺的研究和优化,得到高表达、高产量的包涵体,然后分别用疏水色谱(HPHIC)、离子交换色谱(HPIEC)、排阻色谱(SEC)对rhGM-CSF进行了复性并同时纯化。 论文包括以下五个部分: 1.前言 简要的介绍了蛋白质复性的意义,对近年来发展起来的蛋白质复性新方法进行了系统地综述。对rhGM-CSF的复性及分离纯化研究进展进行了评述。引用文献99篇。 2.rhGM-CSF摇瓶发酵工艺和放大工艺的研究 通过摇瓶发酵对大肠杆菌DH5α/pDH生产rhGM-CSF的培养基、培养温度、诱导时机、诱导维持时间、接种量等进行了研究,选择了较好的摇瓶培养条件。结果表明,大肠杆菌适宜在32℃进行培养,在对数生长前期升温至42℃诱导4～5小时,可获得较高的表达量rhGM-CSF。同时进行了发酵工艺的放大研究。 3.HPHIC对rhGM-CSF复性并同时纯化 成功应用高效疏水色谱(HPHIC)对E. coli表达的rhGM-CSF进行了复性和纯化,研究了固定相、盐种类、流动相pH、流动相中脲浓度,GSH/GSSG比例等因素对rhGM-CSF复性和纯化的影响。在优化条件下,经一步HPHIC可以得到比活为1.58×10~7IU/mg,纯度为95.7%,质量回收率为56.8%的rhGM-CSF。 4.HPIEC对rhGM-CSF复性并同时纯化 采用HPIEC法成功对7.0mol/L盐酸胍变性的rhGM-CSF进行了复性并同时纯化,考察了流动相pH、流动相中脲浓度、GSH/GSSG比例等因素对rhGM-CSF复性的影响。结果表明,GSSG/GSH可有效提高rhGM-CSF二硫键的正确对接和复性效率,而低浓度的脲则可有效抑制蛋白沉淀,可大大提高质量回收率。在最优化条件下,HPIEC一步可使rhGM-CSF在分离纯化的同时进行复性,其比活为(本文来源于《西北大学》期刊2005-06-01）
液相色谱复性论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
近年来,蛋白折迭液相色谱(Protein folding liquid chromatography, PFLC)法越来越多地被应用于包涵体蛋白复性与同时纯化中,PFLC的特点是能在色谱过程将目标蛋白与其它组分分开的同时,还能在色谱柱上进行变性蛋白折迭。本论文①对在大肠杆菌(E.coli)中表达的重组人酪氨酸激酶配体(Recombined human Flt3 ligand, rhFL)进行了摇瓶中菌种培养条件的优化,获得了高表达的rhFL包涵体蛋白；②经超声破碎、离心并多次洗涤沉淀获得纯化的包涵体,并将其溶解于8 mol／L脲中得到变性蛋白的抽提液；③利用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)法,包括一个分析型HPHIC柱、半制备型HPHIC饼和新型单柱二维液相色谱(A novel two-dimensional liquid chromatography using a single column,2DLC-1C)柱进行rhFL包涵体复性与同时纯化的保留特征和复性规律的研究,为大规模制备rhFL蛋白和将其用于临床研究奠定基础。本论文共有四个部分：1.文献综述：对近年来不同机理的PFLC法在蛋白质折迭与同时纯化中的进展和应用,以及FL的结构、生物学功能及临床应用的重要性进行了综述。2.摇瓶中rhFL菌种培养条件的优化：研究了摇瓶中培养基、培养条件(温度、诱导时间、pH、接种量)对rhFL表达的影响。实验结果表明,在培养温度为35℃、选用初始pH值为6.6的SOB培养基、甘油做为碳源、诱导4 h、接种量为4%的条件下,rhFL蛋白的表达量可占菌体总蛋白的47.4%。3. HPHIC法对E.coli表达的rhFL包涵体复性与同时纯化：分别选用不同规格的色谱柱(分析型色谱柱、半制备型色谱饼),通过色谱流动相(小分子添加剂、流速)和进样量对rhFL复性与纯化过程中质量回收率的影响,筛选出rhFL包涵体蛋白在HPHIC柱上复性与纯化的最佳条件和保留规律,初步用荧光光谱法考察了rhFL在色谱柱上复性前后荧光强度变化,并用HPHIC饼对rhFL进行规模化制备。结果分别在固定相配基为苯基的分析型色谱柱、半制备色谱饼上复性与同时纯化rhFL包涵体的质量回收率可达45.9%、67.0%,纯度分别为93.5%、92.1%。对G-CSF依赖株NFS-60的细胞增殖作用的活性结果表明,当与G-CSF协同作用时,平均比活为7.42×108IU／mg。4.新型单柱二维色谱柱对rhFL包涵体复性与同时纯化：新型2DLC-1C柱是在一根色谱柱上兼具有了HIC和IEC两种保留模式,已被用于活性蛋白的快速分离。本工作选用了2DLC-1C柱的HIC模式与和以苯基为配基的HPHIC柱,比较两种色谱柱对rhFL复性与同时纯化过程中流动相的洗脱的盐浓度变化对目标蛋白质量回收率的影响。实验结果显示,在以苯基为配基的色谱柱上,当流动相(NH4)2SO4盐浓度为3.0 mol／L时,rhFL的质量回收率可达到48.7%。而新型的2DLC一1C柱,当流动相为2.0 mol／L(NH4)2SO4时,即可获得的质量回收率为48.5%。从而证实新型填料的2DLC-1C柱在较低盐浓度下可达到较高的质量回收率。此结果也提示这种新型的双保留模式色谱柱,有可能降低规模化制备rhFL蛋白的成本。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
液相色谱复性论文参考文献
[1].谭福春,杨毅聪,李维敏,高栋,王骊丽.高效液相色谱法复性与纯化重组人Delta-like[C].第二十届全国色谱学术报告会及仪器展览会论文集（第四分册）.2015
[2].贾佳.蛋白折迭液相色谱法复性与同时纯化重组人Flt3配体的研究[D].西北大学.2010
[3].王骊丽,贾佳,王菲,耿信笃.新型二维液相色谱柱对重组人FL包涵体的复性与同时纯化[C].全国生物医药色谱学术交流会（2010景德镇）论文集.2010
[4].王军.单柱二维液相色谱复性变性溶菌酶及胰腺癌血清中肿瘤标志物的制备[D].西北大学.2010
[5].王骊丽,耿信笃.源于大肠杆菌蛋白的表达、液相色谱复性与纯化新进展[J].中国科学(B辑:化学).2009
[6].刘振岭,柯从玉,耿信笃.脲变性α-糜蛋白酶的高效液相色谱复性[J].新乡医学院学报.2008
[7].王超展,王骊丽,耿信笃.蛋白折迭液相色谱法复性和纯化大肠杆菌表达的重组人粒细胞集落刺激因子[J].色谱.2007
[8].马慧,闫燕,卫引茂,耿信笃.β-环糊精在变性溶菌酶液相色谱复性中的协助作用[C].首届中国中西部地区色谱学术交流会暨仪器展览会论文集.2006
[9].黄亚渝,童卫,郭立安,耿信笃.还原变性核糖核酸酶的高效液相色谱复性[J].第四军医大学学报.2005
[10].刘建波.重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子发酵工艺和液相色谱法对其复性并同时纯化[D].西北大学.2005
论文知识图
