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【摘要】目的筛选驴胶补血口服液的最佳提取工艺。方法采用正交设计法，以黄芪甲苷为考察指标，对影响驴胶补血口服液提取工艺的因素进行研究。结果最佳提取工艺为煎煮三次，第一次加水量为药材量的12倍，煎煮时间为1.5小时，第二、三次加水量为药材量的12倍，煎煮时间各1小时。结论该法提取工艺黄芪甲苷含量较高，节省能源和适合于工业生产，合理可行。
【关键词】驴胶补血口服液；黄芪甲苷；正交设计；提取工艺
驴胶补血口服液是以《卫生部药品标准》中药成方制剂第十一册驴胶补血颗粒（冲剂）改剂型而得，由阿胶、黄芪、党参、熟地黄、白术、当归六味中药制成，具有滋阴补血、健脾益气、调经养血的作用，用于久病体虚、血亏气虚、妇女血虚经闭、经少等症。为使驴胶补血口服液黄芪甲苷含量测定的指标符合质量标准，药材黄芪的有效成分黄芪甲苷得以充分提取，本研究以提取时间、加水量、乙醇浓度、提取次数为因素，黄芪甲苷为考察指标，采用正交设计法优选最佳提取工艺条件。
1.仪器与材料
1.1仪器
CS-9301PC薄层扫描仪（日本岛津）；定量毛细管（Drummond）；MettlerAE100、240电子天平
1.2材料
黄芪甲苷对照品（110781-201616，中国药品生物制品检定所）；D101型大孔吸附树脂（天津橡胶厂）、层析中性氧化铝（批号：150527广州市医药公司化学试剂玻璃仪器批发部）；MERCKsilicagel60预制板（20×20cm）；薄层层析硅胶G（60型）（批号：20180227）；其它所用试剂圴为分析纯。
2.方法与结果
2．1提取方法及因素水平的确定
2．1．1水蒸汽蒸馏的提取工艺
当归、白术的主要有效成分为挥发油，所以用水蒸汽蒸馏法提取，取100支处方量的当归60g，白术90g，加水浸泡1小时后，开始加热蒸馏，至蒸出液不含油液为止，收集蒸馏液，三批结果表明：蒸馏出的液体量和收率基本接近，说明此工艺比较稳定。
2．1．2水提醇沉工艺
中药提取工艺的确定，是要保证尽量提取有效成分，尽可能减少损失。提取过程不仅直接影响产品的质量和疗效，还关系到中药生产企业的生产成本和经济效益。根据文献及预实验，影响实验结果的主要因素有A：煎煮次数，B：加水量，C：煎煮时间，D：乙醇含量四个因素；以提取液中黄芪甲苷总含量为考核指标，实验按四个因素，每个因素确定了三个水平，应用L9（34）正交表安排实验。因素水平见表1，L9（34）正交表实验安排见表2。
2．2筛选指标的确定
驴胶补血口服液质量标准含量测定的指标为黄芪甲苷以及含氮量，其中中药提取部分测定的指标为黄芪甲苷含量，为使中药有效成分得以充分提取，选择以黄芪甲苷为提取工艺的考察指标。
2．3黄芪甲苷的含量测定
2．3．1黄芪甲苷标准曲线的制备：精密吸取黄芪甲苷对照品液（1.030mg/ml）0.5、1、2、3、4、5、6μl，分别点同一薄层板上，按正文方法展开，显色，扫描，所得数据以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=128.67X+41.366，r=1.000，对照品在0.515～6.180μg范围内呈线性关系。
2．3．2样品溶液的制备：精密量取驴胶补血口服液25ml，用乙醚提取2次，每次30ml，分取下层溶液，用水饱和的正丁醇提取5次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加10％乙醇5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂（内径1cm，长15cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继用70％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2．3．3对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
2．3．4缺黄芪阴性对照溶液的制备：按处方的比例和制法，制成缺黄芪的阴性对照品，取25ml，按供试品溶液的制备方法，制成缺黄芪阴性对照溶液。
2．3．5薄层层析：照薄层色谱法（中国药典2015版一部附录VIB）试验，精密吸取供试品溶液与阴性对照溶液各5ml，对照品溶液1与3，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上（20×20cm预制板），以氯仿-甲醇-水（13：6：2）10℃以下放置过夜的下层溶液作为展开剂，展开，展距16cm，取出，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定。
2．3．6薄层扫描：薄层色谱法（中国药典2015版一部附录VIB薄层扫描法）进行扫描，波长：λs=530nm，λR=700nm，光束=0.4×10mm，线性扫描，步距=0.1mm.测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。
以λs=530nm；光束=0.4×10mm，线性扫描，步距=0.1mm，从原点到前沿进行扫描。阴性对照扫描图在黄芪甲苷对照品相应位置上无吸收峰干扰。
2．4结果分析本试验以黄芪甲苷作为驴胶补血口服液提取工艺的评价指标，由表3结果可见，各因素对提取液中黄芪甲苷含量的影响大小顺序为A﹥B﹥C﹥D。即提取次数对结果影响最大，其次加水量影响也很大。最佳提取条件为A3B3C2D1，即煎煮3次，每次加水12倍量，煎煮1.5小时，醇沉含醇量为55％，从结果可见提取1.5小时与提取1小时得出的药液黄芪甲苷总含量相差很小，没有明显差别。为节省能源和时间，故第一次提取1.5小时，第二、三次各提取1小时。
3、讨论
本实验通过正交设计法对驴胶补血口服液的提取工艺进行优选，以黄芪甲苷为考察指标，采用综合评分的方法筛选最佳工艺。按最佳工艺进行重复性试验，稳定性较理想，适合于工业生产，故此方案合理可行。
参考文献：
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