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H7N9禽流感DNA疫苗的免疫保护效力研究

2020-12-02阅读(743)

H7N9禽流感DNA疫苗的免疫保护效力研究

论文摘要

为检测H7N9禽流感病毒（AIV） DNA疫苗的免疫保护效力,本研究将H7N9禽流感疫苗株A/Chicken/Guangxi/SD098/2017 （H7N9）[CK/GX/SD098/17 （H7N9）]的HA基因密码子优化后,定向克隆至载体pCAGGS中构建重组质粒pCA-SD098。将pCA-SD098转染至293T细胞后,采用间接免疫荧光（IFA）和western blot检测,结果显示,HA蛋白可以在293T细胞中正确表达。分别利用15μg和20μg重组质粒pCA-SD098免疫3周龄SPF鸡,3周后以相同的剂量和方式加强免疫,加强免疫一周后通过鼻腔分别感染105EID50的同源高致病性AIV （HPAIV）CK/GX/SD098/17 （H7N9）和异源低致病性AIV （LPAIV） A/Chicken/Chongqing/SD057/2017 （H7N9）[CK/CQ/SD057/17 （H7N9）],攻毒10 d内记录免疫鸡发病和死亡情况,检测免疫鸡HI抗体水平,并于攻毒后第3 d、第5 d和第7 d无菌采集所有鸡的喉头和泄殖腔拭子,采用红细胞凝集试验（HA）检测病毒的滴度。结果显示,重组质粒pCA-SD098免疫后可以诱导SPF鸡产生较高水平的HI抗体,15μg pCA-SD098剂量免疫鸡后能够完全抵御H7N9 HPAIV的致死性攻击,20μg pCA-SD098剂量可以有效阻断H7N9 LPAIV的感染。攻毒后,所有免疫鸡无发病、无死亡、无排毒,本研究为质粒pCA-SD098作为防控H7N9禽流感的候选DNA疫苗提供了实验依据。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 质粒、病毒株和细胞系
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 H7N9 AIV HA基因重组表达质粒的构建与鉴定
  •   1.4 H7N9 AIV HA蛋白的间接免疫荧光检测（IFA）
  •   1.5 H7N9 AIV HA蛋白的we s te rn blot鉴定
  •   1.6 重组质粒pCA-S D098的免疫效力评价
  •     1.6.1 SPF鸡的免疫试验设计
  •     1.6.2 攻毒保护实验
  •     1.6.3 病毒的分离
  • 2 结果
  •   2.1 重组质粒pCA-S D098的构建及鉴定
  •   2.2 目的蛋白表达的IFA检测结果
  •   2.3 目的蛋白表达的we s te rn blot鉴定
  •   2.4 重组质粒pCA-S D098的免疫效力评价
  •     2.4.1 重组质粒免疫以及攻毒后的SPF鸡HI抗体水平的检测结果
  •     2.4.2 攻毒后SPF鸡发病、死亡情况与病毒分离
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 梁真洁,潘俊慧,于晓菲,陈普成,曾显营,柳金雄,施建忠,邓国华,姜永萍,陈化兰

    关键词: 禽流感,疫苗,免疫,保护效力

    来源: 中国预防兽医学报 2019年09期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

    基金: “十二五”农村领域国家科技计划(（2015BAD12B03,001)

    分类号: S852.65

    页码: 935-939

    总页数: 5

    文件大小: 1630K

    下载量: 438

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