导读:本文包含了荧光素酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:荧光,基因,质粒,病毒,乙脑,转录,报告。
荧光素酶论文文献综述
王志远,刘月环[1]（2019）在《基于荧光素酶双报告基因系统体外验证长爪沙鼠Cip4基因受RXR及T4调控》一文中研究指出目的探讨核转录因子TRB、RXR和激动剂T4对长爪沙鼠Cip4基因表达的调控作用。方法合成长爪沙鼠Cip4基因启动子区序列,构建报告载体p GL3-Cip4;将转录因子TRB、RXR克隆到pc DNA3. 1表达载体上。将p GL3-Cip4,pc DNA3. 1-TRB,pc DNA3. 1-RXR和pRL-TK(参照质粒)载体共转染到HEK-293细胞,构建Cip4基因的荧光素酶双报告系统。观察质粒用量、TRB的激动剂甲状腺素T4等处理对转录活性的影响。结果以长爪沙鼠Cip4启动子区为启动序列的双荧光素酶报告基因系统在(启动子+转录因子):pRL-TK=20∶1、总质粒量为2μg时转染效率最高,并具有最高的荧光素酶活性。检测结果显示,仅加入TRB不改变Cip4的转录水平(P>0. 05),仅加入RXR可以增加Cip4的转录水平(P<0. 05),RXR与T4共同作用可上调Cip4的转录水平(P<0. 001)。TRB与T4共同作用可下调Cip4活性(P<0. 05)。RXR、TRB、T4共存时,Cip4的转录水平显着下调(P<0. 01)。结论本研究证实了T4、TRB及RXR共调控长爪沙鼠Cip4基因的转录,模拟了配体激活型转录因子TRB/RXR活化目的基因Cip4的转录,同时证实了Cip4的转录活化与RXR信号通路密切相关,为揭示甲状腺素在人类NAFLD中的作用机制奠定了基础。本报告基因系统可用于配体激活型转录因子调控Cip4基因表达的机理分析及相关药物的筛选。(本文来源于《中国比较医学杂志》期刊2019年11期）
赵丹华,李玉华[2]（2019）在《带荧光素酶基因的乙型脑炎病毒SA14-14-2感染性克隆的构建及鉴定》一文中研究指出目的:构建带有荧光素酶基因的乙型脑炎(简称乙脑)病毒感染性克隆,并通过体外拯救获得恢复病毒,用于乙脑病毒致病机理研究、病毒感染在小鼠体内的动态分布以及乙脑疫苗免疫效果评价的高通量方法建立。方法:应用反向遗传学、融合PCR以及无缝拼接等体外重组技术,将荧光素酶报告基因(F-LUC)插入到乙脑病毒SA14-14-2全长感染性克隆的5'非编码区与C蛋白编码区之间,线性化后体外转录为RNA并转染BHK_(21)细胞,在细胞感染和动物试验分别检测恢复病毒的拯救和F-LUC的表达情况。结果:成功构建了带有F-LUC报告基因的SA14-14-2乙脑病毒全长感染性克隆,并拯救获得了重组病毒。基因序列分析及细胞与动物水平均证明拯救的病毒可较高水平表达荧光素酶基因。结论:本研究构建出带有荧光素酶报告基因F-LUC的SA14-14-2感染性克隆,并拯救获得带有荧光素酶的重组乙脑病毒,为乙脑血清中和抗体的高通量筛选、病毒感染在小鼠体内的动态分布和致病机理研究奠定了基础。(本文来源于《中国药事》期刊2019年11期）
花瞻,安静,王培刚[3]（2019）在《携带荧光素酶登革亚病毒颗粒的构建和鉴定》一文中研究指出目的拟将荧光素酶基因整合入登革病毒(DENV)亚病毒颗粒(RSPs)中,构建能用于抗体介导的感染增强(ADE)高通量筛选的研究工具。方法将荧光素酶基因luciferase插入DENV包膜蛋白基因prME的3′端,取代prME第二个跨膜区,构建prME-luc融合基因。用prME-luc融合基因转染293T细胞,在上清中检测携带荧光素酶的登革亚病毒颗粒(RSP-luc)。结果转染prME-luc的293T细胞可以将RSP-luc释放至培养上清中,共转染野生型prME能够提高RSP-luc的产量。Western-blot技术确认了RSP-luc中含有DENV包膜蛋白和荧光素酶形成的融合蛋白。RSP-luc易于制备并可通过超速离心分离纯化,且可通过测定荧光素酶活性快速定量。体外实验显示RSP-luc能够与Vero细胞、U937细胞以及小鼠腹腔巨噬细胞等DENV靶细胞结合,结合过程可被受体类似物硫酸肝素竞争性抑制,也可被DENV特异性抗体4E11增强。结论 RSP-luc能够模拟DENV感染过程,有望成为深入研究DENV与宿主相互作用及ADE发生机制的有效工具。(本文来源于《中国热带医学》期刊2019年11期）
刘畅,李楚楚,李智洋[4]（2019）在《基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法的建立》一文中研究指出目的建立一种基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法。方法利用细菌外膜囊泡表面携带高丰度细菌外膜蛋白A(OmpA)的特点,构建OmpA-NanoLuc荧光素酶融合蛋白,根据荧光素酶活性评估样品中的细菌外膜囊泡数量。结果成功构建OmpA-NanoLuc融合蛋白表达载体,受试菌株在表达该融合蛋白后所分泌的外膜囊泡具有稳定的荧光素酶活性。可通过检测荧光素酶活性的方式对细菌外膜囊泡进行半定量检测。结论建立了一种基于荧光素酶标记的细菌外膜囊泡半定量检测方法,可用于评估特定菌株的细胞外膜囊泡分泌水平。(本文来源于《临床检验杂志》期刊2019年10期）
陆琤,张硌,张鹏[5]（2019）在《构建表达膜锚定荧光素酶的载体实现细胞自发光成像》一文中研究指出目的:构建能稳定表达膜锚定Gaussia荧光素酶(GLuc)的载体,以实现细胞自发光成像。方法:采用人源表皮生长因子受体(EGFR)、巨噬细胞集落刺激因子受体(MCSFR)、白细胞介素-4受体α链(IL4Rα)信号肽将GLuc的信号肽替换掉,并在GLuc后分别加上EGFR、MCSFR及IL4Rα的跨膜结构域,构建表达膜锚定的GLuc的载体,用慢病毒感染的方法将其导入永生化的小鼠外周血来源巨噬细胞(iBloodMC),通过在细胞和培养上清中加入GLuc底物检测发光,从而检测GLuc的表达。结果:iBloodMCGLuc-EGFR和iBloodMCGLuc-IL4Rα均能稳定表达荧光素酶,且iBloodMCGLuc-EGFR的GLuc表达量较高,EGFR将GLuc锚定在膜上效果较好。结论:表达膜锚定GLuc的载体构建成功,将其导入细胞,加入底物可实现细胞自发光成像。(本文来源于《中国医学装备》期刊2019年10期）
夏敏杰,胡晶莹,王玉柱,田芳,杨明俊[6]（2019）在《稳定表达荧光素酶的人乳腺癌MCF-7细胞的构建》一文中研究指出目的构建稳定表达荧光素酶的人乳腺癌MCF-7细胞株。材料与方法采用脂质体转染法将荧光素酶基因导入MCF-7细胞,经潮霉素B筛选建立稳定表达荧光素酶的MCF-7-Luc细胞株;将不同数量MCF-7-Luc细胞分别接种于黑色96孔板(细胞数量30000～59)和裸鼠皮下(细胞数量5×106～2.44×103),IVIS LuminaⅢ成像系统体外培养细胞以及裸鼠体内荧光素酶表达效率。结果:筛选得到稳定表达荧光素酶的MCF-7-Luc细胞;IVIS LuminaⅢ成像系统检测结果表明,不论是体外培养的细胞或是裸鼠体内,生物发光强度与接种的细胞数量之间均存在显着的线性关系(体外y=129.32x-26409,R~2=0.9922,P<0.05;体内y=106.82x+1E+07,R~2=0.9404,P<0.05)。结论成功构建了稳定表达荧光素酶的MCF-7-Luc细胞,为研究乳腺癌的发生发展、肿瘤微环境以及抗乳腺癌药物的筛选提供必要条件。(本文来源于《中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集》期刊2019-09-17）
李俊龙,刘小康,王祎[7]（2019）在《TFF1基因启动子双荧光素酶报告基因载体的构建及活性鉴定》一文中研究指出目的:构建含有野生型或突变型人叁叶因子1(Trefoil factor 1,TFF1)基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,并研究雌激素对上述启动子转录活性的影响。方法:设计人野生型和突变型TFF1基因启动子的引物,扩增回收片段,将其克隆到含有荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中构建重组质粒,经双酶切和测序鉴定后转染胆囊癌GBC-SD细胞,24h后采用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶的表达活性。结果:成功构建了野生型pGL3-TFF1质粒和雌激素应答元件(Estrogen response elements,ERE)位点突变的pGL3-TFF1-△ERE突变质粒,激活蛋白1(Activating protein-1,AP-1)位点突变的pGL3-TFF1-△AP-1突变质粒以及pGL3-TFF1-△ERE+△AP-1双突变质粒。经双荧光素酶报告基因检测分析,pGL3-TFF1质粒和pGL3-TFF1-△ERE突变质粒均具有基础转录活性,与对照组比较(P<0.001)。雌激素能进一步增强野生型TFF1启动子质粒和pGL3-TFF1-△ERE突变质粒的启动子转录活性(P<0.01),而对pGL3-TFF1-△AP-1突变质粒以及pGL3-TFF1-△ERE+△AP-1双突变质粒的活性无影响(P>0.05)。结论:本研究成功构建了野生型以及突变型TFF1启动子质粒,发现非经典雌激素受体结合部位——激活蛋白1(AP-1)位点对雌激素诱导的TFF1启动子转录活性增强发挥决定性作用。(本文来源于《四川生理科学杂志》期刊2019年03期）
杨念,李琛,李洪亮,郑燕,房树华[8]（2019）在《基于双荧光素酶报告基因系统的人源SREBP1基因启动子的活性研究》一文中研究指出目的构建固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)启动子双荧光素酶报告基因表达载体,为研究针对SREBP1靶点的天然活性抑制剂筛选奠定基础。方法利用生物信息学软件,对SREBP1基因5′端上游5 000 bp序列进行启动子预测与分析。应用Gibson Assembly方法构建启动子双荧光素酶载体,并将构建成功的pGL3-SREBP1-pro重组质粒和内参质粒p RL-SV40共转染肝癌HepG2细胞并给予天然抑制剂大黄素,检测SREBP1转录活性的抑制效果。结果 SREBP1基因5′端上游2 000 bp区域内有启动子特征序列,存在转录因子结合位点;重组质粒经酶切及测序鉴定证实为阳性克隆,瞬时转染肝癌HepG2细胞后经双荧光素酶报告基因系统检测,所克隆的片段序列具有启动子活性,该活性可被大黄素所抑制。结论成功构建了pGL3-SREBP1-pro双荧光素酶报告基因表达载体,并证实其活性,可为进一步用于针对SREBP1靶点的天然活性抑制剂筛选奠定基础。(本文来源于《天津医药》期刊2019年09期）
罗华灶,李雪,依含,谢君,朱乃硕[9]（2019）在《荧光素酶标记小鼠结肠癌细胞建立活体成像移植瘤模型》一文中研究指出目的:建立稳定表达荧光素酶的小鼠结肠癌细胞株并构建适用于小动物活体成像系统观察的BALB/c鼠皮下移植瘤模型。方法:通过基因重组的方式,将外源基因插入到逆转录病毒载体上,以工具细胞293T包毒后得到病毒,将携带荧光素酶基因的质粒转染到小鼠结肠癌细胞株CT26中,Puromycin筛选出稳定表达荧光素酶的单克隆细胞株。扩增后接种于BALB/c鼠,建立BALB/c鼠皮下移植瘤模型,通过活体动物成像系统监测肿瘤的生长过程。结果:获得了高水平稳定表达荧光素酶的结肠癌单克隆细胞株,该单克隆细胞株与母细胞系CT26具有相似的生长特性。将稳定表达荧光素酶的克隆接种于BALB/c鼠皮下可成瘤,小动物活体成像系统能准确监测肿瘤细胞在体内的生长过程。结论:成功建立了稳定表达荧光素酶的结肠癌单克隆细胞株。采用活体动物成像系统构建的BALB/c鼠皮下结肠癌移植瘤模型是拓展肿瘤体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年17期）
张春利,蔡徐山,宦宇,齐结华,王东江[10]（2019）在《人ADAM17启动子荧光素酶报告质粒的构建与鉴定》一文中研究指出目的构建人去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)启动子的荧光素酶报告质粒,对不同位点进行定点突变,分析其转录活性。方法通过生物信息学分析ADAM17启动子区域的叉头转录因子M1(FoxM1)结合位点,以人胃癌细胞系MGC-803基因组为模板,PCR扩增ADAM17基因启动子-1 365～+51片段,连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中;对FoxM1结合的3个位点进行定点突变;转染至293T细胞后用双荧光素酶报告系统分析其转录活性。结果测序结果显示,ADAM17启动子荧光素酶报告基因及其突变体均构建成功;与pGL3-basic组相比,pGL3-ADAM17(-1 365～+51)组介导的荧光素酶活性明显升高(P<0.05);与对照组相比,过表达FoxM1组介导的荧光素酶活性明显升高(P<0.05),且pGL3-ADAM17(-1 365～+51)组高于突变组(P<0.05)。结论成功构建了人ADAM17启动子荧光素酶报告基因及其突变体,初步验证了ADAM17受转录因子FoxM1的转录调控。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年09期）
荧光素酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建带有荧光素酶基因的乙型脑炎(简称乙脑)病毒感染性克隆,并通过体外拯救获得恢复病毒,用于乙脑病毒致病机理研究、病毒感染在小鼠体内的动态分布以及乙脑疫苗免疫效果评价的高通量方法建立。方法:应用反向遗传学、融合PCR以及无缝拼接等体外重组技术,将荧光素酶报告基因(F-LUC)插入到乙脑病毒SA14-14-2全长感染性克隆的5'非编码区与C蛋白编码区之间,线性化后体外转录为RNA并转染BHK_(21)细胞,在细胞感染和动物试验分别检测恢复病毒的拯救和F-LUC的表达情况。结果:成功构建了带有F-LUC报告基因的SA14-14-2乙脑病毒全长感染性克隆,并拯救获得了重组病毒。基因序列分析及细胞与动物水平均证明拯救的病毒可较高水平表达荧光素酶基因。结论:本研究构建出带有荧光素酶报告基因F-LUC的SA14-14-2感染性克隆,并拯救获得带有荧光素酶的重组乙脑病毒,为乙脑血清中和抗体的高通量筛选、病毒感染在小鼠体内的动态分布和致病机理研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
荧光素酶论文参考文献
[1].王志远,刘月环.基于荧光素酶双报告基因系统体外验证长爪沙鼠Cip4基因受RXR及T4调控[J].中国比较医学杂志.2019
[2].赵丹华,李玉华.带荧光素酶基因的乙型脑炎病毒SA14-14-2感染性克隆的构建及鉴定[J].中国药事.2019
[3].花瞻,安静,王培刚.携带荧光素酶登革亚病毒颗粒的构建和鉴定[J].中国热带医学.2019
[4].刘畅,李楚楚,李智洋.基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法的建立[J].临床检验杂志.2019
[5].陆琤,张硌,张鹏.构建表达膜锚定荧光素酶的载体实现细胞自发光成像[J].中国医学装备.2019
[6].夏敏杰,胡晶莹,王玉柱,田芳,杨明俊.稳定表达荧光素酶的人乳腺癌MCF-7细胞的构建[C].中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集.2019
[7].李俊龙,刘小康,王祎.TFF1基因启动子双荧光素酶报告基因载体的构建及活性鉴定[J].四川生理科学杂志.2019
[8].杨念,李琛,李洪亮,郑燕,房树华.基于双荧光素酶报告基因系统的人源SREBP1基因启动子的活性研究[J].天津医药.2019
[9].罗华灶,李雪,依含,谢君,朱乃硕.荧光素酶标记小鼠结肠癌细胞建立活体成像移植瘤模型[J].中国免疫学杂志.2019
[10].张春利,蔡徐山,宦宇,齐结华,王东江.人ADAM17启动子荧光素酶报告质粒的构建与鉴定[J].基础医学与临床.2019
论文知识图
