重组腺病毒过表达Notch1受体胞内结合域(NICD1)外源性激活Notch信号通路

论文摘要

目的:构建Notch1受体胞内结合域（Notch1 intracellular domain,NICD1）的重组腺病毒AdNICD1,探讨外源性过表达AdNICD1对Notch信号通路激活的影响。方法:利用高保真PCR（high fidelity PCR,Hi-Fi PCR）扩增NICD1编码区,并通过Gibson Assembly方法将其克隆至腺病毒载体中,经过菌落PCR、测序鉴定后,在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,再次通过质粒PCR鉴定,然后运用PacⅠ酶切线性化后用重组腺病毒载体转染过表达pTP基因的人胚肾293细胞（human embryo kidney 293 cell line,HEK293）中进行包装,收取病毒后使用过表达pTP基因的HEK293细胞扩增重组腺病毒AdNICD1。运用AdNICD1感染脂肪来源的间充质干细胞（immortalized multipotent adipose-derived mesenchymal stem cells,iMAD）,检测病毒感染效率;通过Q-PCR检测NICD1和Notch下游基因表达情况;利用Westernblot检测NICD1在蛋白水平的表达情况。结果:成功构建过表达NICD1的重组腺病毒并有效感染iMAD;利用AdNICD1可明显增加NICD1在基因和蛋白水平的表达,并激活Notch信号下游基因的表达。结论:成功构建过表达NICD1的重组腺病毒,并有效激活Notch信号通路。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 廖军义,杜婷婷,黄伟,何通川,徐伟

关键词: 受体胞内结合域,重组腺病毒,信号通路

来源: 南京医科大学学报(自然科学版) 2019年03期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 重庆医科大学附属第一医院骨科,重庆市第七人民医院内分泌与肾病科,芝加哥大学医学中心分子肿瘤实验室

基金: 国家自然科学基金面上项目(81371972,81572142),重庆市科委基础研究与前沿探索项目(cstc2018jcyjAX0088),重庆市研究生科研创新项目(CYB15098),重庆医科大学附属第一医院院内培育基金资助项目(2018PYJJ-11)

分类号: Q78

页码: 320-325

总页数: 6

文件大小: 5806K

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