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结核分枝杆菌Rv0674蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

2020-11-27阅读(788)

结核分枝杆菌Rv0674蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

论文摘要

目的在大肠埃希菌（E. coli）中表达结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）Rv0674蛋白,纯化后制备多克隆抗体,并检测抗体效价。方法用PCR技术从MTB H37Rv基因组中扩增Rv0674基因,克隆至p EASYBlunt E1表达载体后,转化入E. coli BL21（DE3）中,用优化后的IPTG诱导表达条件表达Rv0674蛋白,His trap TM HP亲和层析柱纯化目的蛋白;将纯化的蛋白腹腔注射BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA和Western blot法检测抗体效价及特异性。结果成功获得了Rv0674序列正确的重组质粒p EASY-E1-Rv0674,挑选出了高表达Rv0674基因的菌株,确定的最适表达条件为1. 0 mmol/L IPTG 28℃诱导表达8 h,获得了相对分子质量约26 500的可溶性蛋白;免疫BALB/c小鼠后,能刺激小鼠产生多克隆抗体,获得的抗血清具有良好的抗原结合特性,且效价大于1∶51 200。结论成功获得了高纯度的Rv0674蛋白,并首次制备出小鼠抗Rv0674蛋白的多克隆抗体,为进一步研究Rv0674蛋白的功能和临床诊断结核病（tuberculosis,TB）的应用奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株、质粒及基因组
  •   1.2 实验动物
  •   1.3 主要试剂及仪器
  •   1.4 溶液配制
  •     1.4.1 裂解（上样）缓冲液（SPB）
  •     1.4.2 清洗液（CEPB）
  •     1.4.3 洗脱缓冲（EPB）
  •     1.4.4 封闭液
  •     1.4.5 LB液体培养基
  •   1.5 引物设计及合成
  •   1.6 Rv0674基因的扩增
  •   1.7 Rv0674蛋白重组表达质粒的构建
  •   1.8 Rv0674蛋白重组表达菌株的构建
  •   1.9 Rv0674蛋白诱导表达条件的优化
  •   1.1 0 目的蛋白表达形式分析及Western blot鉴定
  •   1.1 1 重组蛋白的纯化
  •   1.1 2 抗小鼠血清的制备
  •   1.1 3 抗体效价的检测
  •   1.1 4 抗体特异性鉴定
  • 2 结果
  •   2.1 Rv0674基因扩增产物的鉴定
  •   2.2 重组表达质粒pEASY-E1-Rv0674的鉴定
  •   2.3 Rv0674蛋白诱导表达条件的优化
  •   2.4 表达产物的鉴定
  •   2.5 纯化产物的鉴定
  •   2.6 小鼠血清抗体效价
  •   2.7 抗体特异性
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 杨延辉,董利军,梁忠喆,刘通,张炜,杨玉荣,杨志伟

    关键词: 结核分枝杆菌,基因,多克隆抗体

    来源: 中国生物制品学杂志 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 基础医学

    单位: 宁夏医科大学

    基金: 国家自然科学基金（81560604,81202567和81460311）,宁夏高等学校一流学科建设项目（NXYLXK2017B07）,宁夏医科大学校级课题（XY201425,XY201527和XY201725）,大学生创新项目

    分类号: R392

    DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002915

    页码: 1370-1376

    总页数: 7

    文件大小: 404K

    下载量: 109

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