斑马鱼gpr98基因敲除试验模型的构建

斑马鱼gpr98基因敲除试验模型的构建

论文摘要

gpr98基因突变与多种疾病相关,该基因在人类和斑马鱼中高度保守。建立斑马鱼gpr98基因突变体稳定系,可为阐释gpr98基因功能提供良好的动物模型和研究基础。本文利用CRISPR/Cas9基因敲除技术在斑马鱼gpr98基因2号外显子上选取两个相距42 bp的靶位点,分别体外合成sgRNA,并与Cas9 mRNA一起共注射至斑马鱼胚胎单细胞期的胚胎内。随机挑选发育72 h胚胎提取基因组DNA进行PCR分析,结果表明:除了有野生型DNA带外,部分胚胎有一条比野生型DNA小的带;进一步将F0代阳性个体与野生型的斑马鱼杂交,对杂交后代进行基因型分析,并成功筛选到缺失48 bp(Δ48 bp)的稳定遗传突变的gpr98基因敲除斑马鱼模型。该试验模型的构建为研究gpr98基因在心血管以及骨骼等组织器官的发育及相关疾病发生中的作用奠定了重要基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 试验材料
  •     1.1.1 试验动物
  •     1.1.2 试验质粒
  •     1.1.3 主要试剂
  •   1.2 试验方法
  •     1.2.1 sgRNA靶位点设计
  •     1.2.2 sgRNA的合成
  •     1.2.3 Cas9 mRNA的制备
  •     1.2.4 显微注射以及靶位点有效性检测
  •     1.2.5 突变体的筛选
  • 2 结果与分析
  •   2.1 GPR98蛋白结构域的分析以及靶位点的确定
  •   2.2 胚胎注射有效性分析
  •   2.3 F0代阳性突变嵌合体筛选
  •   2.4 稳定遗传的检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 邓明,曾宇茜,刘乐,郭纪锋,邓云,唐北沙

    关键词: 斑马鱼,基因

    来源: 激光生物学报 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 中南大学湘雅医院神经内科,湖南师范大学生命科学学院

    分类号: Q78

    页码: 258-263+269

    总页数: 7

    文件大小: 432K

    下载量: 211

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