荧光定量PCR检测原料乳中粘质沙雷氏菌

荧光定量PCR检测原料乳中粘质沙雷氏菌

论文摘要

为建立检测原料乳中粘质沙雷氏菌(S.marcescens)定性定量的检测方法,本研究利用S. marcescens S-核糖基高半胱氨酸酶(luxS)基因片段设计1对特异性引物,设计并建立了S. marcescens luxS基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的检测方法。结果显示,该方法可特异性检测粘质沙雷氏菌的存在,检测的最低限为6.9×102cfu/mL。与其他原料乳中常见的微生物均无交叉反应,比常规PCR的检测限(6.9×103cfu/mL)要广。对2015年11月2016年1月长江下游地区8个牧场的原料乳进行检验,结果表明本检测方法具有较好的敏感性、特异性和实用性。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与仪器
  •   1.2 试验方法
  •     1.2.1 引物设计及合成
  •     1.2.2 luxS基因克隆
  •     1.2.3 荧光定量PCR标准曲线的建立
  •     1.2.4 特异性试验
  •     1.2.5 灵敏度评价
  •     1.2.6 人工阳性样品乳检测
  •     1.2.7 荧光定量PCR检测原料乳中的S.marcescens
  • 2 结果与分析
  •   2.1 PCR产物的凝胶电泳
  •   2.2 荧光定量PCR标准曲线
  •   2.3 荧光定量PCR试验的敏感性
  •   2.4 荧光定量PCR试验的特异性
  •   2.5 荧光定量PCR方法的应用
  • 3 讨论与结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 姜鸿瑞,韩紫音,夏海磊,王梦琦,冀德君,毛永江,杨章平,张慧敏

    关键词: 原料乳,粘质沙雷氏菌,荧光定量,核糖基高半胱氨酸酶

    来源: 中国奶牛 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 扬州大学动物科学技术学院

    基金: 江苏省博士后科研资助计划(1501118B),江苏省农业科技自主创新资金项目(CX171005),江苏省优势学科项目(PAPD)

    分类号: TS252.7

    DOI: 10.19305/j.cnki.11-3009/s.2019.05.012

    页码: 48-51

    总页数: 4

    文件大小: 1534K

    下载量: 139

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