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转录因子Tbx18对升主动脉平滑肌细胞的重编程作用

论文摘要

目的探讨转录因子Tbx18腺病毒载体在体外转染升主动脉平滑肌细胞的重编程作用。方法采用组织块贴壁法培养升主动脉平滑肌细胞,4～7d后在光学显微镜下观察细胞形态,细胞传代后随机分为空白组、绿色荧光蛋白（GFP）组、Tbx18组,Tbx18组转染携带Tbx18和GFP腺病毒,GFP组转染等量GFP腺病毒,空白组不转染病毒。转染4d后通过RT-qPCR和Western blotting检测3组相关转录因子环核苷酸门控离子通道蛋白亚型4（HCN4）、Tbx3、NKx2.5和心肌细胞特异性标志物心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）表达;通过免疫荧光技术检测Tbx18组及GFP组HCN4蛋白表达。结果与GFP组和空白组比较,Tbx18组HCN4、Tbx3和cTnⅠ mRNA和蛋白表达明显上调,NKx2.5蛋白表达明显降低,差异有统计学意义（0.135±0.033 vs 0.291±0.104、0.344±0.067,P<0.05）。免疫荧光结果显示,倒置荧光显微镜下Tbx18组HCN4蛋白发出红色荧光,并且与细胞转染的绿色荧光和细胞核蓝色荧光大致重合,而GFP组几乎无红色荧光发出。结论 Tbx18腺病毒载体在体外能够将升主动脉平滑肌细胞重编程为起搏样细胞。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 升主动脉平滑肌细胞培养及鉴定
  •     1.2.2 人Tbx18腺病毒载体的构建及扩增
  •     1.2.3 Tbx18腺病毒转染及转染效率
  •     1.2.4 RT-qPCR检测
  •     1.2.5 转染细胞中目的蛋白表达的检测
  •     1.2.6免疫荧光检测
  •   1.3 统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 VSMC培养及鉴定
  •   2.2 病毒转染MOI
  •   2.3 3组起搏相关基因mRNA表达比较
  •   2.4 3组起搏相关蛋白表达比较
  •   2.5 GFP组和Tbx18组免疫荧光检测起搏蛋白HCN4表达
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王凤媛,唐艳红,王晞,赵庆彦,王腾,黄从新

    关键词: 转录因子,腺病毒科,主动脉,肌细胞,平滑肌,转染,肌钙蛋白

    来源: 中华老年心脑血管病杂志 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 心血管系统疾病

    单位: 武汉大学人民医院心内科武汉大学心血管病研究所心血管病湖北省重点实验室

    基金: 湖北省技术创新专项（2016ACA153）,中央高校基本科研业务费专项资金（2042015kf0229）

    分类号: R54

    页码: 1309-1313

    总页数: 5

    文件大小: 2650K

    下载量: 53

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/0c76cd4d65d1f042c70be401.html