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小花棘豆内生真菌内参基因的筛选及其Sac表达分析

论文摘要

为了筛选小花棘豆Alternaria oxytropis内生真菌最稳定的内参基因,以小花棘豆内生真菌OW7.8菌株为研究对象,ACTIN、TUB、GAPDH、APRT、18S rRNA为候选内参基因,利用qRT-PCR技术,GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件共同评价候选内参基因的表达稳定性;以培养基中分别添加苦马豆素合成前体化合物赖氨酸（L-Lysine acid,L-Lys）、α-氨基己二酸（L-2-Aminoadidpic acid,L-A）和哌啶酸（L-Pipecolic acid,L-P）的不同生长时间的菌株为实验组,不添加为对照,利用qRT-PCR对真菌酵母氨酸还原酶基因（saccharopine reductase gene,Sac）表达分析。研究表明,Actin为表达最稳定的内参基因,实验组Sac表达量均高于对照组;3种前体化合物均促进Sac的表达,其中添加L-P的真菌Sac表达量最高,生长32 d的真菌的表达量达到最大值;添加L-A和L-Lys的真菌Sac表达量分别在生长第26天和第23天达到最大值。本研究结果为探索Sac对苦马豆素合成的影响提供了基础理论数据。

论文目录

  • 1 结果与分析
  •   1.1 真菌总RNA的提取
  •   1.2 候选内参基因的PCR扩增
  •   1.3 候选内参基因的qRT-PCR
  •     1.3.1 溶解曲线和扩增曲线分析
  •     1.3.2 内参基因的Ct值分析
  •   1.4 候选内参基因的稳定性评价
  •     1.4.1 GeNorm软件分析
  •     1.4.2 NormFinder软件分析
  •     1.4.3 BestKeeper软件分析
  •   1.5 真菌Sac表达情况
  • 2 讨论
  • 3 材料与方法
  •   3.1 试验材料
  •   3.2 试验方法
  •     3.2.1 真菌总RNA的提取及cDNA合成
  •     3.2.2 候选内参基因和目的基因的选择和引物的设计
  •     3.2.3 候选内参基因的扩增
  •     3.2.4 候选内参基因的qRT-PCR
  •     3.2.5 内生真菌Sac的表达
  •     3.2.6 数据处理和分析
  • 作者贡献

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 赵利娜,卢萍,杜玲,牛艳芳

    关键词: 内生真菌,实时荧光定量,内参基因,酵母氨酸还原酶基因

    来源: 基因组学与应用生物学 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学

    单位: 内蒙古师范大学生命科学与技术学院

    基金: 国家自然科学基金项目(31460235),内蒙古师范大学研究生科研创新基金项目(CXJJS17093)共同资助

    分类号: Q943.2

    DOI: 10.13417/j.gab.038.005091

    页码: 5091-5098

    总页数: 8

    文件大小: 1434K

    下载量: 123

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/1438ad5df7a083e9ac75b911.html