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Fisetin对H2O2诱导细胞内ROS的清除作用及机制探讨

论文摘要

活性氧（reactive oxygen species, ROS）在非酒精性脂肪肝、心血管疾病、癌症、糖尿病等疾病发生发展的过程中具有重要作用。HepG2细胞是评价抗氧化剂对活细胞氧化损伤保护作用的常用细胞模型。为了探讨非瑟酮（fisetin）对H2O2诱导细胞内ROS的清除作用及其机制,将HepG2细胞随机分为空白对照组（control）、溶剂对照组（solvent control）、H2O2模型组（H2O2model group）、fisetin干预组（fisetin+H2O2）、fisetin单独处理组（fisetin）,检测不同干预组细胞存活率大小及细胞内ROS水平,同时检测核因子E2相关因子2 （nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2）、Kelch样ECH相关蛋白1 （Kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1）及Ⅱ相酶血红素氧合酶-1 （heme oxygenase-1, HO-1）、谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基（glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLC）、谷氨酰半胱氨酸连接酶修饰亚基（glutamate-cysteine ligase modifier subunit, GCLM）、醌氧化还原酶1（NAD（P）H quinone oxidoreductase 1, NQO1）的表达。此外,通过构建Nrf2敲低细胞系,进一步明确Nrf2在fisetin清除ROS过程中的作用。研究发现,与H2O2模型组相比, fisetin干预组细胞存活率显著上升; fisetin可抑制由H2O2引起的HepG2细胞内ROS的增加,上调Nrf2、HO-1蛋白表达,并下调Keap1蛋白表达; Nrf2稳定敲低后,细胞内ROS水平增加。实验结果表明, fisetin可能通过激活Keap1/Nrf2/抗氧化反应元件（antioxidant response element, ARE）通路诱导HO-1的表达,从而在抗氧化损伤过程中发挥细胞保护作用。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验对象
  •   1.2 实验仪器与主要试剂
  •   1.3 实验方法
  •     1.3.1 细胞培养
  •     1.3.2 实验分组
  •     1.3.3 Nrf2敲低细胞系的构建
  •     1.3.4 MTT实验
  •     1.3.5 ROS检测
  •     1.3.6 Western-blot检测
  •     1.3.7 统计学处理
  • 2 实验结果
  •   2.1 Fisetin和H2O2对HepG2细胞存活率的影响
  •   2.2 Fisetin对H2O2诱导的HepG2细胞内ROS的影响
  •   2.3 Fisetin对Ⅱ相酶表达水平的影响
  •   2.4 Fisetin对Nrf2、Keap1蛋白表达的影响
  •   2.5 Nrf2在fisetin清除ROS过程中的作用
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张妍薇,郑皖,杨人贵,陈静芳,向晓婧,陈继华

    关键词: 非瑟酮,抗氧化,活性氧,核因子相关因子,血红素氧合酶

    来源: 生命科学研究 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 药学

    单位: 中南大学湘雅公共卫生学院,遂宁市中心医院,长沙市疾病预防控制中心,长沙市中心医院神经内科

    基金: 国家自然科学基金资助项目(81472972)

    分类号: R96

    DOI: 10.16605/j.cnki.1007-7847.2019.06.002

    页码: 437-443

    总页数: 7

    文件大小: 1022K

    下载量: 291

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/1c84dc0e407f8706cc405310.html