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B族黄曲霉毒素抗原合成设计及特异性、广谱性抗体制备与特性分析

论文摘要

为制备B族黄曲霉毒素（BGAFs）特异性强、广谱性好的抗体,本研究根据黄曲霉毒素B1（AFB1）的分子结构和活性位点,采用肟化活泼酯法（OAE）、氨甲基化法（MOA）、混合酸酐法（MA）、半缩醛法（SA）、环氧化物法（EP）和烯醇醚衍生物法（EED）6种方法合成BGAFs人工抗原AFB1-BSA,并通过UV和SDS-PAGE进行鉴定;采用AFB1-BSA免疫新西兰白兔制备多克隆抗体（AFB1pAb）,间接ELISA检测AFB1pAb效价,间接竞争ELISA（icELISA）分析其敏感性,交叉反应试验（CR）分析其特异性和广谱性。结果表明,AFB1-BSA合成成功,在BGAFs抗原合成的6种方法中OAE效果最好,AFB1与BSA的分子结合比为8.46∶1;AFB1pAb的间接ELISA效价为1∶（1.28×104）,IC50为10.32μg·L-1,与AFB2、AFG1、AFG2、AFM1、AFM2的CR分别为75.21%、44.13%、14.72%、16.36%、1.44%。本研究制备出了高效价、敏感、特异、广谱的AFB1pAb,为BGAFs免疫检测方法的建立奠定了物质和技术基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 试剂与材料
  •   1.2 BGAFs人工抗原合成设计
  •   1.3 BGAFs人工抗原鉴定
  •     1.3.1 UV扫描
  •     1.3.2 SDS-PAGE鉴定
  •   1.4 AFB1 pAb制备
  •   1.5 AFB1 pAb特性分析
  •     1.5.1 效价测定
  •     1.5.2 敏感性鉴定
  •     1.5.3 特异性鉴定
  • 2 结果与分析
  •   2.1 BGAFs人工抗原鉴定结果
  •     2.1.1 UV鉴定结果
  •     2.1.2 SDS-PAGE鉴定结果
  •   2.2 AFB1 pAb特性分析
  •     2.2.1 效价测定
  •     2.2.2 敏感性分析
  •     2.2.3 特异性与广谱性分析
  • 3 讨论
  •   3.1 BGAFs抗原合成方法设计
  •   3.2 BGAFs人工抗原的合成路线
  •   3.3 BGAFs人工抗原的免疫效果分析
  • 4 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张海棠,王晓斐,职爱民,王亚楠,王自良

    关键词: 族黄曲霉毒素,抗原合成设计,多克隆抗体,特性分析

    来源: 核农学报 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 河南科技学院动物科技学院,河南旭瑞食品有限公司

    基金: “十二五”国家科技支撑计划项目(2014BAD13B05),河南省产学研项目(162107000056)

    分类号: TS207.5

    页码: 2414-2420

    总页数: 7

    文件大小: 1441K

    下载量: 114

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/1db0870177b6359af2f50482.html