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拟南芥乙酰乳酸合成酶基因(Atals)多位点突变以及转基因过表达植株除草剂抗性分析

论文摘要

乙酰乳酸合成酶（ALS）是支链氨基酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成途径中的关键酶,也是多种除草剂的靶点。为了研究als基因不同突变位点组合后其抗除草剂抗性的变化,并整合和增强植株对不同类型除草剂的抗性,本研究对已知抗性位点进行组合并进行了拟南芥转基因分析。我们通过重叠延伸PCR技术体外突变扩增四个已知位点突变的P197S/R199A/W574S/S653F拟南芥Atals,克隆到pCAMBIA1 300-GFP载体上,从而构建了四个位点突变的m4Atals-GFP融合蛋白过表达载体。然后用农杆菌介导法转化野生型拟南芥Col-0,获得转基因株系。采用潮霉素抗性筛选鉴定阳性转基因植株,并利用荧光体式显微镜观察过表达植株以及在蛋白水平检测GFP-m4Atals融合蛋白表达情况。对纯合转基因株系进行除草剂抗性分析。分析表明转基因拟南芥具有磺酰脲和咪唑啉酮两种除草剂的整合抗性。此研究有助于系统地分析als基因不同突变位点对抑制剂的抗性,有效避免和应对自然界als单一位点突变的杂草的困扰。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 Atals基因突变的设计及全长的获得
  •     1.2.2 突变位点克隆载体的构建
  •     1.2.3 pCAMBIA1300-m4Atals-GFP 表达载体转化农杆菌
  •     1.2.4 农杆菌GV3101转染野生型拟南芥
  •     1.2.5 抗性苗的筛选
  •     1.2.6 Leica M205FA荧光体式显微镜观察过表达植株
  •     1.2.7 蛋白提取,分离及蛋白质印迹分析
  •     1.2.8 过表达基因拟南芥的抗除草剂分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 als基因全长与突变基因的克隆
  •   2.2 过表达m4Atals-GFP的拟南芥植株的筛选与鉴定
  •   2.3 过表达基因拟南芥的抗除草剂分析
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 文素珍,谢吉勇,钟英丽

    关键词: 拟南芥,过表达,磺酰脲,咪唑啉酮

    来源: 激光生物学报 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 湖南农业大学生物科学技术学院

    基金: 国家自然科学基金项目(31401432)

    分类号: Q943.2

    页码: 571-577

    总页数: 7

    文件大小: 3331K

    下载量: 147

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/2885b1224f2ef3a16be11d85.html