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IAP家族抑制衰老的骨髓间充质干细胞的凋亡

论文摘要

目的:探讨衰老的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡抗性是否增加且是否通过凋亡抑制蛋白（IAP）家族介导。方法:用DMEM/F12中加入10%胎牛血清（FBS）的完全培养基培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）至第三代,使用D-半乳糖（D-gal）诱导成衰老的BMSC并用β-半乳糖苷酶染色做衰老鉴定。用肿瘤坏死因子α（TNF-α）和环己酰亚胺（CHX）共同处理正常对照组与衰老组的BMSC,通过贴壁细胞计数统计其生存率,并通过蛋白印迹法检测两组细胞中Cleaved PARP、Cleaved Caspase3蛋白、IAP家族成员c-IAP1、c-IAP2、XIAP以及衰老相关标志蛋白的水平。再用IAP抑制剂AT-406处理衰老的细胞,CCK-8检测处理组以及未处理组细胞的细胞活力。最后用凋亡抑制剂z-VAD-fmk和AT-406共同处理正常对照组与衰老组细胞,观察z-VAD-fmk能否减少IAP蛋白被抑制后所引起的细胞死亡。结果:与正常对照组相比,衰老的BMSC中由TNF-α和CHX共同诱导引起的细胞死亡数明显减少,凋亡标志物Cleaved PARP和Cleaved Caspase3蛋白的水平降低,而IAP家族成员c-IAP1、c-IAP2和XIAP的蛋白水平升高。用AT-406处理衰老BMSC后细胞的死亡数明显高于未处理的衰老BMSC组,通过z-VAD-fmk抑制凋亡通路后,AT-406处理的衰老细胞的死亡数减少。结论:衰老BMSC通过升高IAP家族蛋白水平从而提高对凋亡的抵抗能力。

论文目录

  • 前言
  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 大鼠原代BMSCs的分离培养
  •   1.3 细胞培养
  •   1.4 CCK-8试剂盒检测细胞增殖活力
  •   1.5 β-半乳糖苷酶染色
  •   1.6 Western blot蛋白印迹分析
  •   1.7 流式细胞仪检测细胞凋亡
  •   1.8 统计学分析
  • 2 结果
  •   2.1 D-gal诱导骨髓间充质干细胞衰老
  •   2.2 D-gal诱导的衰老细胞凋亡抗性升高
  •   2.3 D-gal诱导的衰老细胞中c-IAP1、c-IAP2和XIAP表达升高
  •   2.4 AT-406诱导衰老细胞凋亡
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王珮琳,滕松松,崔直,马春辉,俞银贤,易诚青

    关键词: 衰老,抗凋亡

    来源: 现代生物医学进展 2019年16期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 上海市第一人民医院上海交通大学骨科

    基金: 国家自然科学基金面上项目(81371979)

    分类号: R329.2

    DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2019.16.002

    页码: 3006-3012

    总页数: 7

    文件大小: 427K

    下载量: 107

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/28c3795fc04b9b3495cd1a43.html