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Bst DNA聚合酶的纯化及等温扩增检测体系的构建

论文摘要

Bst DNA聚合酶是等温扩增反应中的一个关键酶,但由于专利限制,目前国内实验室所使用的Bst DNA聚合酶大多需要从国外进口,价格昂贵且长途运输影响酶活性,因此亟需自主生产出Bst DNA聚合酶应用于等温扩增检测技术.通过构建Bst Fragement的原核表达质粒,采用原核蛋白表达系统和His-Tag亲和纯化手段,制备成本低,活性高,特异性强的Bst DNA聚合酶.同时,针对特定的模板,对自制Bst DNA聚合酶的扩增反应进行了进一步优化,用不同的产物鉴定方法对扩增效果进行检测,并最终筛选出该酶最优的扩增反应条件为60 mM K+、30 mM（NH4）2SO4、pH为9.0.最后,验证了Bst DNA聚合酶能用于快速准确检测肺炎支原体、肺炎衣原体,降低了相关病原体核酸检测的成本,为之后核酸检测在基层医疗的更广泛应用提供了条件.

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 菌种和材料
  •   1.2 主要试剂和仪器
  •   1.3 实验方法
  •     1.3.1 重组质粒p ET-15b-Bst Fragement plasmid的构建
  •     1.3.2 重组蛋白Bst DNA聚合酶的表达
  •     1.3.3 重组蛋白Bst DNA聚合酶的纯化
  •     1.3.4 重组蛋白Bst DNA聚合酶的活性鉴定
  •     1.3.5 重组蛋白Bst DNA聚合酶检测特定病原体
  • 2 结果
  •   2.1 重组质粒pET-15b-Bst Fragment plasmid的构建
  •   2.2 重组蛋白Bst DNA聚合酶的表达与纯化
  •   2.3 重组蛋白Bst DNA聚合酶的活性鉴定
  •   2.4 重组蛋白Bst DNA聚合酶检测病原体
  • 3 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 谭拥军,吴莎莎,谭桂湘,向勤

    关键词: 聚合酶,重组蛋白,扩增,核酸检测

    来源: 湖南大学学报(自然科学版) 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 湖南大学生物学院

    基金: 国家自然科学基金资助项目(81472718)~~

    分类号: Q78

    DOI: 10.16339/j.cnki.hdxbzkb.2019.12.014

    页码: 98-106

    总页数: 9

    文件大小: 2038K

    下载量: 174

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/32e0d30c3f12381d6b7360b1.html