目的探讨yes相关蛋白（YAP）精氨酸甲基化修饰对Hippo通路激活及肿瘤细胞增殖的影响。方法在HEK293T细胞中过表达并纯化FLAG-YAP,通过质谱鉴定YAP的精氨酸甲基化修饰及其修饰位点;Western印迹法和体外激酶反应检测YAP精氨酸甲基化修饰对YAP 127位丝氨酸（S127）磷酸化修饰的影响;免疫荧光染色法检测YAP精氨酸甲基化修饰对其核定位的影响。利用慢病毒载体系统构建敲低YAP蛋白的稳定细胞株,在敲低YAP的稳定株中分别回补YAP野生型及其修饰位点突变体,荧光实时定量PCR（q-RT-PCR）检测Hippo通路下游靶基因转录情况,MTS[3-（4,5-dimethylthiaol-2-yl）-5-（3-car-boxy-methoxyphenyl）-2-（4-sulfophenyl）-2H-tetrazoliu-m,inner salt]实验和克隆形成实验检测YAP精氨酸甲基化修饰对肿瘤细胞增殖能力的影响。结果质谱结果显示YAP 124位精氨酸（R124）存在单甲基化修饰,并受细胞所处营养状况的调控;经体外激酶反应、Western印迹和斑点印迹杂交（Dot blot）验证,YAP R124单甲基化修饰能抑制YAP S127的磷酸化修饰;免疫荧光染色实验证实,YAP R124甲基化修饰促进YAP蛋白入核;q-RT-PCR结果表明,YAP R124甲基化修饰激活Hippo通路下游靶基因转录;MTS和克隆形成实验证实,YAP R124甲基化修饰促进肿瘤细胞的增殖。结论 YAP R124单甲基化修饰能抑制YAP S127的磷酸化修饰,促进YAP蛋白进入细胞核,激活Hippo通路下游靶基因转录,进而促进肿瘤细胞增殖。
类型: 期刊论文
作者: 赵圆圆,朱跃,裴华东,陈亚丽
关键词: 非小细胞肺癌,精氨酸甲基化修饰,通路,肿瘤细胞增殖
来源: 军事医学 2019年11期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技
专业: 肿瘤学
单位: 安徽医科大学研究生院,军事科学院军事医学研究院生命组学研究所,蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心国家蛋白质科学中心(北京),西安交通大学第一附属医院肿瘤放疗科,美国乔治华盛顿大学医学院
分类号: R734.2
页码: 851-857
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