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构建香菇转化的同源筛选标记的研究

论文摘要

通过比对分析多种导致真菌内源萎锈灵抗性的琥珀酸脱氢酶B亚基(SdhB)氨基酸序列的突变位点,将香菇(Lentinula edodes)SdhB氨基酸序列第243位的组氨酸替换为亮氨酸,构建了香菇萎锈灵抗性同源筛选标记载体,以农杆菌介导转化小米粒培养的香菇菌丝。转化子经5次传代后,PCR扩增验证插入片段,并观察绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况。结果显示:香菇单核体和双核体菌株经转化后,均能筛选到具有萎锈灵抗性的转化子,单核体菌株的转化率为34%,显著高于双核体菌株(4%);单核体转化子中的同源筛选标记及报告基因稳定性较好。本研究构建的萎锈灵抗性同源筛选标记可有效地在香菇遗传转化体系中应用。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 供试菌株及载体
  •   1.2 主要试剂与仪器
  •   1.3 萎锈灵对香菇菌丝毒性检测
  •   1.4 香菇琥珀酸脱氢酶B亚基萎锈灵抗性位点分析
  •   1.5 香菇萎锈灵抗性农杆菌工程菌株的制备及PCR检测
  •   1.6 农杆菌介导的香菇菌丝转化、筛选及稳定性检测
  •   1.7 转化子PCR扩增验证及绿色荧光蛋白检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 萎锈灵对香菇菌丝的毒性
  •   2.2 香菇琥珀酸脱氢酶B亚基萎锈灵抗性位点分析
  •   2.3 农杆菌工程菌株的PCR检测及香菇菌丝转化
  •   2.4 香菇菌株的转化率和转化子的稳定性
  •   2.5 转化子中CbxR基因的检测
  •   2.6 转化子中egfp基因的表达
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李菲,章炉军,姜宁,刘建雨,于海龙,尚晓冬,宋春艳,谭琦

    关键词: 香菇,萎锈灵抗性基因,同源筛选标记,农杆菌转化,绿色荧光蛋白

    来源: 食用菌学报 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 农业科技

    专业: 园艺

    单位: 上海海洋大学食品学院,上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

    基金: 国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-20),上海市食用菌产业技术体系建设专项[沪农科产字(2018)第9-03号)],上海市科委项目(18391900200)

    分类号: S646.12

    DOI: 10.16488/j.cnki.1005-9873.2019.04.003

    页码: 16-22+161-162

    总页数: 9

    文件大小: 1189K

    下载量: 74

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/3f51c7aece7a8c241bacafc8.html