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PD-L1基因敲除小鼠构建及初步表型验证

论文摘要

目的:程序性死亡配体-1（PD-L1）是免疫调节途径的重要因子,是抗肿瘤免疫疗法中重要的靶标之一。利用CRISPR/Cas9技术成功构建PD-L1基因敲除小鼠模型,并初步分析其表型。方法:构建Cas9和sgRNA载体,并转录获得RNA,通过显微注射方式将RNA注射到C57BL/6小鼠受精卵中,经过鉴定获得F0代阳性小鼠。F0代小鼠与野生型C57BL/6小鼠交配获得F1代杂合子小鼠,再通过F1代小鼠自交获得F2代纯合子小鼠品系。随后通过Real-Time PCR和流式实验分别检测PD-L1基因在mRNA和蛋白质水平上的表达情况。结果:Real-Time PCR和流式实验检测结果显示与野生型C57小鼠相比,PD-L1纯合子小鼠的PD-L1 mRNA相对表达水平和细胞上的蛋白质表达均有显著性下降,仅测定到本底的信号,证实已成功构建PD-L1基因敲除小鼠品系,为PD-L1体内基因功能研究提供了新的小鼠模型。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 伦理声明
  •   1.2 试剂、材料和动物
  •     1.2.1 质粒和动物
  •     1.2.2 主要试剂
  •   1.3 实验方法
  •     1.3.1 sgRNA设计和寡聚核苷酸链的合成
  •     1.3.2 sgRNA表达载体构建
  •     1.3.3 sgRNA和Cas9表达载体的体外转录
  •     1.3.4 阳性小鼠品系获得及鉴定
  •     1.3.5 Real-Time PCR检测
  •     1.3.6 流式细胞术（FACS）检测淋巴细胞PD-L1表达
  • 2 结果
  •   2.1 PD-L1基因敲除小鼠获得
  •   2.2 PD-L1基因敲除小鼠mRNA水平敲除效果检测
  •   2.3 PD-L1基因敲除小鼠蛋白水平敲除效果验证
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 万颖寒,慈磊,王珏,龚慧,李俊,董茹,孙瑞林,费俭,沈如凌

    关键词: 基因敲除

    来源: 中国生物工程杂志 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 基础医学,肿瘤学

    单位: 模式生物及比较医学研究联合实验室上海实验动物研究中心,上海南方模式生物科技股份有限公司,同济大学生命科学与技术学院

    分类号: R-332;R73-36

    DOI: 10.13523/j.cb.20191206

    页码: 42-49

    总页数: 8

    文件大小: 4370K

    下载量: 158

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/4b55c2e74ce7562769622e72.html