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利用BAC/gal K系统构建缺失潜伏相关转录物启动子LAP1的伪狂犬病突变病毒

论文摘要

伪狂犬病病毒感染猪后,在耐过猪中均能形成潜伏感染。在潜伏感染期间,病毒基因组仅大量转录病毒潜伏相关转录物（latency-associated transcripts,LATs）。为了研究潜伏相关转录物启动子对LAT表达特征的影响,通过构建缺失LAT启动子LAP1、并添加绝缘子cHS4的供体质粒,利用感染性细菌人工染色体克隆（bacterial artificial chromosome,BAC）操作平台和galK（半乳糖激酶）正负筛选系统,获得BAC载体pBAC-JS-cHS4-△LAP1b,BAC载体与质粒pcDNA3.1-cre共转染Vero细胞后获得突变病毒vJS-cHS4-△LAP1b。空斑和生长曲线结果显示,vJS-cHS4-△LAP1b与亲本病毒具有相似的生物学特性。vJS-cHS4-△LAP1b感染Vero细胞后,RT-PCR检测显示表达大的潜伏相关转录本（largelatencytranscripts,LLT）。vJS-cHS4-△LAP1b的构建为深入研究LAT表达特征及功能提供了依据和基础。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 病毒、细胞、载体和菌株
  •   1.2 工具酶和主要试剂
  •   1.3 序列合成和引物设计
  •   1.4 转移载体pBluescript-L1-cHS4-R2的构建
  •   1.5 galK正负筛选系统
  •     1.5.1 扩增galK基因
  •     1.5.2 galK正筛选
  •     1.5.3 galK负筛选
  •   1.6 病毒拯救
  •     1.6.1 拯救病毒vJS-cHS4-△LAP1b-BAC
  •     1.6.2 拯救病毒vJS-cHS4-△LAP1b
  •   1.7 病毒体外生物学特性分析
  •     1.7.1 病毒一步生长曲线
  •     1.7.2 病毒空斑实验
  •   1.8 vJS-cHS4-△LAP1b LLT表达特征的RT-PCR检测
  • 2 结果
  •   2.1 pBluescript-L1-cHS4-R2载体的构建及鉴定
  •   2.2 正筛选鉴定结果
  •   2.3 负筛选鉴定结果
  •   2.4 突变病毒的筛选及纯化
  •   2.5 病毒一步生长曲线
  •   2.6 病毒空斑大小及形态
  •   2.7 病毒LLT RT-PCR检测结果
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 陈静,张丽荣,童武,叶超,童光志,郑浩

    关键词: 伪狂犬病病毒,潜伏感染,细菌人工染色体克隆,半乳糖激酶

    来源: 中国动物传染病学报 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国农业科学院上海兽医研究所

    基金: 国家重点研发计划项目(2016YFD0500100),上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字(2016)第4-2号)

    分类号: S852.65

    页码: 7-13

    总页数: 7

    文件大小: 2194K

    下载量: 107

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/5087e0143f9bec32515cb298.html