目的通过构建小鼠Vamp8基因启动子及转录调节区荧光素酶报告质粒,寻找小鼠Vamp8基因启动子的核心区域及转录调控元件。方法通过检索美国国家生物技术信息中心（NCBI）基因数据库和真核生物启动子数据库（EPD）,获取包含可能的启动子及转录调节区域的小鼠Vamp8基因序列（-1033～+2330 bp）。以小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）基因组DNA为模板,PCR扩增钓取该序列,构建小鼠Vamp8基因启动子荧光素酶报告质粒,通过荧光素酶活性检测,验证其启动子活性。随后,通过截短突变及生物信息学分析,寻找小鼠Vamp8基因启动子的核心区和主要转录调控区,以及可能的转录因子。结果成功克隆了小鼠Vamp8基因的转录调控区,构建了5个系列截短的小鼠Vamp8基因启动子荧光素酶报告质粒和3个小鼠Vamp8基因转录调节区荧光素酶报告质粒,测序均正确。通过荧光素酶活性检测、生物信息学分析及验证,发现小鼠Vamp8基因-198～+85 bp区域的启动子活性最高,推测其为小鼠Vamp8基因启动子核心区域;而-1033～-199 bp和-198～-37 bp区域分别存在Vamp8基因转录负调控和正调控元件。转录因子CEBPB可促进Vamp8基因转录,其主要结合位点位于-198～-1 bp,与生物信息学预测相符。结论成功构建了小鼠Vamp8基因启动子及转录调节区双荧光素酶报告系统,发现小鼠Vamp8基因-198～+85 bp区域为该基因启动子核心区域,-1033～-199 bp和-198～-37 bp区域参与其转录调控。转录因子CEBPB可能通过与小鼠Vamp8基因-198～-1 bp区域的DNA序列结合,促进其转录。上述研究为阐明Vamp8基因转录调控的分子机制奠定了基础。
类型: 期刊论文
作者: 张书玮,曹诚,刘萱
关键词: 基因,启动子,转录调控,双荧光素酶报告系统
来源: 军事医学 2019年11期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技,基础科学
专业: 生物学
单位: 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所
分类号: Q753
页码: 839-845
总页数: 7
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