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应用于pol-miR-26a,26b靶基因检测的psiCHECK-dmrt1-3’UTR报告质粒的建立

论文摘要

为明确牙鲆雄性性别相关关键基因dmrt1 （doublesex and mab-3-related transcription factor 1）是否为pol-miR-26a、pol-miR-26b作用的靶基因,本研究利用PCR技术克隆了dmrt13’UTR区,并成功引入了特殊限制性内切酶PemⅠ和NotⅠ的识别位点;将得到的dmrt1 3’UTR区片段和psiCHECK-2载体进行双酶切、连接后得到野生型重组质粒;并且利用定点诱变法对dmrt1 3’UTR区进行体外定点诱变,将pol-miR-26a、pol-miR-26b识别的靶序列ACTGAA突变为TGACTT,形成突变型重组质粒。经琼脂糖凝胶电泳鉴定、双酶切及测序分析,成功获得了可用于pol-miR-26a、pol-miR-26b的靶基因dmrt1验证的野生型psiCHECK-dmrt1-3’UTR和突变型psiCHECK-mutated dmrt1-3’UTR的报告质粒,为进一步研究pol-miR-26a、pol-miR-26b的靶基因dmrt1鉴定和功能奠定了基础。

论文目录

  • 1 结果与分析
  •   1.1 靶基因预测
  •   1.2 靶基因3'UTR区克隆
  •   1.3 野生型和突变型报告质粒的鉴定
  •   1.4 定点突变
  • 2 讨论
  • 3 材料与方法
  •   3.1 材料与试剂
  •   3.2 实验方法
  •     3.2.1 dmrt1 3'UTR区miRNA结合位点预测
  •     3.2.2 引物设计、RNA提取与反转录及PCR扩增
  •     3.2.3 报告靶基因野生型质粒的构建
  •     3.2.4 报告靶基因突变型质粒的构建
  • 作者贡献

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 徐明琴,王前龙,王新艳,张俊玲,孙文慧,向玉婷

    关键词: 牙鲆

    来源: 基因组学与应用生物学 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技,农业科技

    专业: 生物学,水产和渔业

    单位: 上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室,上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心,上海海洋大学上海水产养殖工程技术研究中心

    基金: 国家自然科学青年基金项目(41306128)资助

    分类号: Q78;S917.4

    DOI: 10.13417/j.gab.038.000568

    页码: 568-573

    总页数: 6

    文件大小: 279K

    下载量: 100

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/5bf8aa170e5fb994210734c1.html