为研究盐胁迫下大麦耐盐相关蛋白的互作蛋白,利用Gateway技术构建盐胁迫下大麦的酵母双杂交文库。首先提取受盐胁迫的大麦总RNA,分离mRNA并合成双链cDNA,并通过位点特异重组系统（BP重组）将双链cDNA转入pDONR22载体,构建初级文库。然后,将初级文库质粒通过同源重组转入pGADT7-DEST载体,构建次级文库。最后,将次级文库质粒转入酵母菌株Y187中构建酵母双杂交文库。经鉴定,该酵母双杂交文库的滴度为7.0×107 CFU/mL,插入cDNA片段平均长度大于1 000 bp,重组率大于95.8%。所构建的酵母双杂交文库质量较高,可用于后续的互作蛋白筛选工作。
类型: 期刊论文
作者: 李颖波,宗营杰,刘成洪,陆瑞菊,黄剑华,杜志钊,许建华,王亦菲
关键词: 盐胁迫,大麦,酵母双杂交,文库
来源: 上海农业学报 2019年06期
年度: 2019
分类: 农业科技
专业: 农作物
单位: 上海市农业科学院生物技术研究所上海市农业遗传育种重点实验室,上海市农业科技服务中心,光明种业有限公司
基金: 国家自然科学基金(31601295),上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字2016第6-1-2号),上海市科学技术委员会科研计划项目(16391900600),现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-05-01A-02)
分类号: S512.3
DOI: 10.15955/j.issn1000-3924.2019.06.01
页码: 1-5
总页数: 5
文件大小: 491K
下载量: 90
本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/64d669cc1b1ef42945f6228d.html