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PPARγ1的SUMO化修饰对巨噬细胞M2极化的抑制作用

论文摘要

目的·探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ1（peroxisome proliferator activated receptorγ1,PPARγ1）的SUMO化修饰在白介素4（interleukin-4,IL-4）诱导巨噬细胞M2极化过程中的作用和机制。方法·在HEK293T细胞中共转染FLAG-PPARγ1-WT/突变体质粒、HA-SUMO1质粒,使用标签FLAG及HA的抗体分别进行免疫共沉淀后进行蛋白质印迹分析,确认PPARγ1的SUMO化修饰和修饰位点。过表达FLAG-PPARγ1-WT、HA-SUMO1及野生型RGS-SENP1以及去SUMO化修饰酶活缺失的突变体RGSSENP1mut,证明SENP1是PPARγ1的去SUMO化修饰酶。用IL-4刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7和体外分离的原代小鼠腹腔巨噬细胞,使其向M2型活化,使用PPARγ及SUMO1的抗体进行免疫共沉淀,明确内源性PPARγ1的SUMO化修饰在M2极化过程中的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-4刺激后的PPARγ1野生型及突变型稳转细胞系RAW264.7中M2相关基因的m RNA水平。用染色质免疫共沉淀实验比较PPARγ1 WT及突变体结合于精氨酸酶Ⅰ（arginaseⅠ,Arg1）启动子的能力。结果·PPARγ1蛋白第77位赖氨酸（K77R）能被SUMO化修饰,并能被SENP1去SUMO化。在IL-4诱导巨噬细胞M2型极化时,PPARγ1的SUMO化水平降低。稳定表达SUMO化位点突变体PPARγ1-K77R的RAW264.7细胞,Arg1 mRNA水平升高;PPARγ1-K77R与Arg1的启动子结合能力增强,促进Arg1表达。结论·PPARγ1通过去SUMO化促进下游Arg1基因的表达从而参与调控巨噬细胞M2型极化。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 质粒
  •     1.1.2 细胞株
  •     1.1.3 抗体
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 质粒的构建
  •     1.2.2 细胞培养、转染和诱导极化
  •     1.2.3 稳转细胞株建立
  •     1.2.4 核质分离
  •     1.2.5 免疫共沉淀
  •     1.2.6 蛋白质印迹法（Western blotting）分析
  •     1.2.7 反转录及qPCR
  •     1.2.8 染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation,Ch IP）
  •   1.3 统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 PPARγ1的SUMO化修饰
  •   2.2 SENP1对PPARγ1去SUMO化修饰的催化作用
  •   2.3 IL-4对巨噬细胞内PPARγ1的SUMO化修饰的抑制作用
  •   2.4 PPARγ1的SUMO化修饰对IL-4诱导的巨噬细胞M2型极化的抑制作用
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王秀芝,左勇

    关键词: 化修饰,巨噬细胞,极化

    来源: 上海交通大学学报(医学版) 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 基础医学

    单位: 上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系

    分类号: R392

    页码: 1402-1408

    总页数: 7

    文件大小: 3786K

    下载量: 171

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/6ed5b9572fea438b2c91215d.html