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大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR检测方法的建立与应用

论文摘要

目的建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法。方法根据大鼠冠状病毒N基因、仙台病毒L基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本和实验动物组织样本,并与ELISA方法比对。结果双重PCR扩增出大鼠冠状病毒(168 bp)和仙台病毒(262 bp)目的条带,PCR扩增产物测序结果利用核酸BLAST功能进行同源序列对比,仙台病毒和大鼠冠状病毒同源性分别为100%和99%。仙台病毒和大鼠冠状病毒的检测下限为1.56×102 copies/μL。特异性检测对小鼠肝炎病毒扩增,产生片段大小近似大鼠冠状病毒产物。应用建立的双重PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本,30份DNA标本均被检出;检测94份实验动物肺组织样本,结果均阴性。结论建立的双重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对实验动物仙台病毒和大鼠冠状病毒病原体的快速检测。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 实验动物
  •     1.1.2 病毒、细胞株
  •     1.1.3 引物
  •     1.1.4 试剂和仪器
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 病毒培养
  •     1.2.2 标准毒株和肺组织样品RNA的抽提
  •     1.2.3 RNA逆转录为c DNA
  •     1.2.4 双重PCR反应体系和反应条件
  •     1.2.5 PCR扩增产物测序
  •     1.2.6 特异性试验
  •     1.2.7 敏感性试验
  •     1.2.8 动物样本的检测
  • 2 结果
  •   2.1 双重PCR方法的建立及优化
  •   2.2 特异性试验
  •   2.3 敏感性试验
  •   2.4 双重PCR检测方法在动物样本检测中的初步应用
  •     2.4.1 双重PCR方法在仙台病毒人工感染样本检测中的初步应用
  •     2.4.2 双重PCR方法在实验动物临床样本检测中的初步应用
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 国内会议

    作者: 孟钰榕,郑龙,祝岩波,王璇,尤红煜,刘健敏,栗彦宁,连伟光,张东明,王俊霞

    关键词: 大鼠冠状病毒,仙台病毒,双重

    来源: 第十五届中国实验动物科学年会 2019-09-21

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学,基础医学

    单位: 河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部,河北医科大学第二医院

    分类号: R373.1;R-332

    DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.068203

    页码: 466-475

    总页数: 10

    文件大小: 1198k

    下载量: 4

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/70c95a35b36b96cb6f39b43e.html