Print

猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立与应用

论文摘要

猪德尔塔冠状病毒（porcine delta coronavirus,PDCoV）是2012年中国香港首次发现的冠状病毒,能引起感染仔猪水样腹泻,最终脱水死亡。研究根据PDCoV保守的衣壳蛋白基因（N）序列设计特异性引物,建立荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法在6.31×106～6.31×101copies/μL,Ct与模板浓度之间具有良好的线性关系,斜率为-4.90,相关系数为0.999。所有标准品模板出现唯一熔解峰,敏感性下限为6.31×101copies/μL,PEDV和TGEV等均没有检测信号。对60份临床样品检测,PDCoV阳性率为5.0%,表明本研究建立的方法可以快速灵敏地检测PDCoV,从而为PDCoV的预防和疫苗研制奠定基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 主要试剂和仪器
  •   1.2 引物设计
  •   1.3 病毒RNA 提取
  •   1.4 标准品的制备
  •   1.5 荧光定量PCR 反应条件的优化
  •   1.6 荧光定量PCR标准曲线的建立
  •   1.7 敏感性试验
  •   1.8 特异性试验
  •   1.9 重复性试验
  •   1.10 临床样品的检测
  • 2 结果
  •   2.1 目的基因扩增
  •   2.2 标准质粒的制备
  •   2.3 荧光定量PCR 反应条件
  •   2.4 标准曲线的建立
  •   2.5 敏感性分析
  •   2.6 特异性分析
  •   2.7 重复性分析
  •   2.8 临床样品的检测
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张世亨,黄海鑫,尹彦文,施开创,郑敏,汪伟,曹亮,赵翠青,刘立明,鲁会军,孙文超,金宁一

    关键词: 猪德尔塔冠状病毒,基因,实时荧光定量

    来源: 中国兽医学报 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 吉林农业大学动物科学技术学院,军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所,温州大学病毒学研究所,广西动物疫病预防控制中心

    基金: 国家重点研发计划资助项目(2018YFD0500104),浙江省青年基金资助项目(LQ19C180001),温州市基础性科研基金资助项目(N20180010),广西科技重大专项资助项目(桂科AA17204057),广西水产畜牧科技资助项目(桂渔牧科201528017)

    分类号: S852.651

    DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.12.03

    页码: 2288-2292

    总页数: 5

    文件大小: 1044K

    下载量: 351

    相关论文文献

    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/7794fa6f9ed96be662f9b7e8.html