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发酵透明质酸寡糖兽疫链球菌工程菌株的构建

论文摘要

透明质酸（HA）广泛应用于医学、化妆品、食品等领域。HA的生物活性取决于其分子量（Mw）。透明质酸寡糖由于具有重要的生理活性与特殊生理功能,在医药领域具有重要的应用前景。兽疫链球菌因其发酵周期短、生产强度较强的特点,在商业生产HA上具有广泛的应用。为了高效发酵合成透明质酸寡糖和解决发酵过程的溶氧问题,文中通过在兽疫链球菌WSH-24中过表达透明质酸合酶HasA以及优化表达水蛭来源的透明质酸酶LHAase。重组菌株摇瓶发酵24h,透明质酸寡糖积累至0.97g/L,比野生菌提高了182.0%。在3L发酵罐中发酵24 h,透明质酸寡糖生产强度为294.2 mg/（L·h）,HA积累至7.06 g/L,比野生菌的罐上水平提高了112.4%。文中所构建的发酵合成透明质酸寡糖的兽疫链球菌重组菌株具有重要的应用前景。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌种与质粒
  •     1.1.2 酶、引物、DNA marker及相关试剂盒
  •   1.2 培养基及培养方法
  •     1.2.1 培养基
  •     1.2.2 培养方法
  •   1.3 相关方法
  •     1.3.1 制备兽疫链球菌感受态细胞
  •     1.3.2 兽疫链球菌的电转化及重组子的鉴定
  •     1.3.3 菌体生长密度测定
  •     1.3.4 透明质酸寡糖样品的分离纯化
  •     1.3.5 透明质酸寡糖含量测定
  •     1.3.6 透明质酸寡糖的分子量
  •     1.3.7 水蛭透明质酸酶活力的测定方法
  •     1.3.8 LHAase的纯化及质谱检测LHAase水解液中的HA寡糖
  • 2 结果与分析
  •   2.1 表达系统与重组兽疫链球菌的构建
  •   2.2 过表达hasA基因对HA产量的影响
  •   2.3 LHAase的分泌表达及优化
  •   2.4 透明质酸寡糖一步发酵合成
  • 3 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 韦朝宝,堵国成,陈坚,康振

    关键词: 糖胺聚糖,兽疫链球菌,透明质酸寡糖,水蛭透明质酸酶,透明质酸分子量

    来源: 生物工程学报 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 有机化工,一般化学工业

    单位: 江南大学工业生物技术教育部重点实验室生物工程学院,江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室生物工程学院

    基金: 国家自然科学基金(No.31670092),江南大学自主科研计划重点项目(No.JUSRP51707A),国家轻工技术与工程一流学科自主课题(No.LITE2018-16)资助~~

    分类号: TQ281;TQ920.6

    DOI: 10.13345/j.cjb.180405

    页码: 805-815

    总页数: 11

    文件大小: 1411K

    下载量: 277

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/7f652e8c6c99ce7f6c6a7848.html