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CRISPR/dCas9在苜蓿中华根瘤菌中的建立与应用

论文摘要

本文探讨了CRISPR/dCas9系统对苜蓿中华根瘤菌Sinorhizobium meliloti 320内源hemE基因的弱化效果,以提高其维生素B12的能力。实验首先验证了CRISPR/dCas9系统及CRISPR/dCas9系统不同N20靶向位点在S.meliloti 320中对外源基因gfp的弱化效果。结果显示,当添加诱导剂1%木糖时,单位OD荧光值降低为对照菌株的34.18%,当N20靶位靠近翻译起始位点时,对结构基因弱化效果明显。进一步探究CRISPR/dCas9对S.meliloti 320中内源的弱化效果发现,在加入终浓度为1%木糖诱导后,hemE基因的转录水平与对照相比下降了28.3%。将hemE基因弱化后的工程菌进行摇瓶发酵,其维生素B12产量较对照株提高了9.86%。研究结果显示,hemE基因的弱化有效促进了代谢流引向维生素B12合成,CRISPR/dCas9系统对S.meliloti 320内源结构基因具有较好的弱化效果。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株、质粒与引物
  •   1.2 培养基、酶及主要试剂
  •   1.3 主要实验仪器
  •   1.4 载体的构建
  •   1.5 全细胞荧光测量
  •   1.6 不同的N20靶向位点对外源基因gfp的弱化效果
  •   1.7 弱化内源基因的研究
  •   1.8 摇瓶发酵
  •   1.9 分析方法
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 外源基因的弱化
  •   2.2 CRISPR/dCas9系统不同N20靶向位点对外源基因gfp的弱化效果
  •   2.3 内源基因的弱化
  •   2.4 CRISPR/dCas9系统弱化hemE对VB12产量的影响
  • 3 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 吴香莹,董会娜,刘振权,张大伟

    关键词: 维生素,基因

    来源: 工业微生物 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 生物学,一般化学工业

    单位: 大连工业大学食品学院,中国科学院天津工业生物技术研究所

    基金: 天津市杰出青年科学基金(17JCJQJC45300),国家自然科学基金(No.31800086)

    分类号: Q943.2;TQ920.1

    页码: 32-38

    总页数: 7

    文件大小: 647K

    下载量: 115

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/817b2cd5d89d04a13474a535.html