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菊芋HtCCR1基因的克隆与表达分析

论文摘要

肉桂酰辅酶A还原酶（cinnamoyl-CoA reductase,CCR）是木质素合成代谢的关键酶。该研究以菊芋（Helianthus tuberosus L.）‘廊芋8号’为材料,克隆到1个菊芋的CCR基因,命名为HtCCR1（GenBank登录号为MN205540）,其开放阅读框（ORF）长975bp,编码324个氨基酸,其中含有FRSDRe保守结构域。系统进化分析表明,HtCCR1与向日葵CCR蛋白（XP021989763.1）共聚于一支,二者亲缘关系最近。实时定量PCR分析表明,HtCCR1基因在菊芋茎和叶中的表达量显著高于在根和块茎中;盐（150mmol·L-1 NaCl）胁迫处理6、12和24h后,处理组HtCCR1基因的表达量均显著高于对照组;干旱（20%PEG6000）胁迫6和12h后,处理组HtCCR1基因的表达较对照组均显著上调。成功构建pET-28a-HtCCR1原核表达载体,转化大肠杆菌BL21（DE3）并诱导出了符合预期大小的蛋白,表明HtCCR1重组蛋白已成功表达。该研究结果为进一步研究HtCCR1基因的功能及利用基因工程手段调节菊芋中木质素的生物合成奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 试验材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 总RNA提取及cDNA合成
  •     1.2.2 HtCCR1基因ORF的克隆
  •     1.2.3 生物信息学分析
  •     1.2.4 HtCCR1基因的表达分析
  •     1.2.5 HtCCR1基因原核表达载体的构建及诱导表达
  • 2 结果与分析
  •   2.1 菊芋HtCCR1基因的克隆
  •   2.2 HtCCR1的生物信息学分析
  •   2.3 HtCCR1的表达分析
  •   2.4 HtCCR1原核表达载体的构建及诱导表达
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张新业,苏彦苹,乔洁,王聪艳,李文静

    关键词: 菊芋,肉桂酰辅酶还原酶,原核表达,荧光定量,胁迫处理

    来源: 西北植物学报 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 园艺

    单位: 廊坊师范学院生命科学学院,河北省动物多样性重点实验室

    基金: 河北省高等学校科学技术研究项目(BJ2018044),廊坊市科技支撑计划(2019012003)

    分类号: S632.9

    页码: 1919-1928

    总页数: 10

    文件大小: 9335K

    下载量: 80

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/81a467610d659536ad8e3e17.html