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实时荧光定量PCR技术快速检测志贺氏菌

论文摘要

目的建立实时荧光定量PCR法快速检测志贺氏菌。方法提取志贺氏菌基因组为模板扩增virA基因片段,将目的片段连接至pMD19-T载体得到重组质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,验证所得到的重组质粒,以紫外分光光度计测量重组质粒吸光度值A260,并换算为质粒拷贝数后作梯度稀释得到不同浓度的质粒标准品;进行荧光定量PCR分析并通过特异性、灵敏性实验以验证该方法的可行性。结果重组质粒标准品浓度在103～108 copies/μL范围内线性关系良好（r2>0.99）,实时荧光定量PCR检测志贺氏菌时出现良好的扩增曲线,鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均未出现扩增曲线。志贺氏菌的检出限为100CFU/m L。结论本方法便捷、高效、可靠,可用于志贺氏菌的快速定性定量检测。

论文目录

  • 1 引言
  • 2 材料与方法
  •   2.1 仪器、试剂与材料
  •   2.2 实验方法
  •     2.2.1 目的基因片段的扩增
  •     2.2.2 重组质粒的构建
  •     2.2.3 志贺氏菌实时荧光定量PCR标准曲线的建立
  •     2.2.4 志贺氏菌实时荧光定量PCR实验条件的验证
  •   2.3 模拟样品的检测
  • 3 结果与分析
  •   3.1 重组质粒的构建及验证
  •   3.2 标准曲线的建立
  •   3.3 特异性实验结果
  •   3.4 灵敏性实验结果
  •   3.5 模拟样品检测结果
  • 4 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 戴陈伟,童琳,武昌俊,许勇,李舜,朱倩云,蔡标

    关键词: 志贺氏菌,实时荧光定量,标准曲线,特异性,灵敏性

    来源: 食品安全质量检测学报 2019年23期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 化学,轻工业手工业

    单位: 安徽省医学科学研究院

    基金: 安徽省十三五医疗卫生重点专科建设项目(皖卫科教[2017]30号),2018年度安徽省卫计委科研计划项目(2018YK008)~~

    分类号: TS207.4;O657.3

    DOI: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2019.23.040

    页码: 8037-8041

    总页数: 5

    文件大小: 1207K

    下载量: 404

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/81e3341af93d1f271e7c86a0.html