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非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的原核表达与反应原性鉴定

论文摘要

p54蛋白为非洲猪瘟病毒（ASFV）的主要结构蛋白之一,参与病毒对靶细胞的吸附与进入。为深入研究p54结构蛋白的抗原性,根据GenBank序列号（MK128995）对应的E183L基因序列,设计1对特异性引物扩增其整个CDS区,并克隆至pET-30a（+）载体,构建了表达p54蛋白的重组质粒pET-30a（+）-p54。用BL21（DE3）转化该质粒,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳,可见重组质粒表达出1条分子量约为20 kDa的特异性条带,且重组表达蛋白以融合表达蛋白形式存在于上清。进一步通过His亲和层析法纯化目的蛋白,用ASFV阳性血清进行蛋白质免疫印迹反应,发现表达的重组p54蛋白能与ASFV阳性血清产生特异性反应,表明p54蛋白表达成功。本研究为ASFV抗体ELISA检测方法的建立奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 样品来源
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 p54基因特异性引物设计和序列扩增
  •   1.4 pET-30a（+）-p54重组表达载体构建
  •   1.5 p54蛋白表达
  •   1.6 p54表达蛋白纯化
  •   1.7 可溶性表达蛋白鉴定
  • 2 结果
  •   2.1 p54蛋白目的基因扩增
  •   2.2 重组质粒pET-30a（+）-p54构建
  •   2.3 p54蛋白表达
  •   2.4 p54蛋白纯化与鉴定
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 官丽娟,邵钰,任伟杰,宫枫举,韩同福,邹艳丽,孙学强,吴晓东,张志,黄保续

    关键词: 非洲猪瘟病毒,结构蛋白,蛋白,表达

    来源: 中国动物检疫 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国动物卫生与流行病学中心

    基金: 国家重点研发计划项目（2017YFC1200503）

    分类号: S852.651

    页码: 63-67

    总页数: 5

    文件大小: 1464K

    下载量: 473

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/8fbd5c5bb15e07553e58f3b9.html