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猪流行性腹泻病毒CH/JLDH/2016株分离鉴定及S基因序列分析

论文摘要

为了研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的变异情况,试验采用分离病毒时添加胰蛋白酶的方法,从病死仔猪肠组织中成功分离鉴定出1株PEDV变异毒株,命名为CH/JLDH/2016,应用纳米巢式PCR法鉴定分离株,电镜负染观察,并对该分离株S基因序列特征和遗传进化关系进行分析。结果表明:经纳米巢式PCR扩增得到目的条带;在透射电子显微镜下可观察到完整的病毒粒子,具有冠状病毒典型结构;与现有疫苗株CV777相比,分离株S基因存在16处碱基的插入、10处碱基的缺失并伴有大量碱基突变,其推导的氨基酸序列存在5个氨基酸的插入和3个氨基酸的缺失;该分离株与疫苗株CV777处于不同分支,亲缘关系较远,而与近几年分离得到的PEDV变异毒株亲缘关系较近。说明PEDV呈现进化和变异趋势。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 病料
  •   1.2 细胞及主要试剂
  •   1.3 主要仪器
  •   1.4 引物的设计与合成
  •   1.5 样品的处理
  •   1.6 病毒的分离
  •   1.7 样品RNA的提取及反转录
  •   1.8 纳米巢式PCR鉴定
  •   1.9 电镜负染观察
  •   1.10 S基因的PCR扩增及序列分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 病毒的分离
  •   2.2 纳米巢式PCR鉴定
  •   2.3 电镜负染观察
  •   2.4 S基因的PCR扩增
  •   2.5 S基因的序列分析
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 曹东梅,张双,朱俊辉,郭梦茹,陆伟,刘岸,何浩,王开,胡桂学

    关键词: 猪流行性腹泻病毒,分离鉴定,变异毒株,胰蛋白酶,基因,遗传进化

    来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 吉林农业大学动物科学技术学院,长春市朝阳区动物疫病预防控制中心,吉林市动物疫病预防控制中心,榆树市畜牧业管理局

    基金: 吉林省重点科技攻关项目(20150204026NY)

    分类号: S852.651

    DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2017.12.0308

    页码: 91-95+181

    总页数: 6

    文件大小: 538K

    下载量: 215

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/98d56c5059bb3f42da139e89.html