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布鲁氏菌RPA-LFD检测方法的建立

论文摘要

为建立一种快速,便于现场检测布鲁氏菌的方法,本研究基于布鲁氏菌（Brucella） Omp31基因的保守片段设计并合成引物和探针,通过对反应条件优化建立了布鲁氏菌重组酶聚合酶-侧流层析试纸条（RPA-LFD）检测方法,对该方法进行特异性、敏感性、重复性检测。结果显示该检测方法在39℃反应20 min以上便可肉眼观察到明显结果。特异性试验结果显示除布鲁氏菌基因组呈阳性外,维氏气单胞菌、大肠杆菌、甲型副伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、乙型溶血性链球菌均为阴性,特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法最低可检测到101拷贝/μL的质粒标准品,比常规PCR高出100倍,敏感性较高;重复性试验结果显示,3次批间重复试验无明显差异,稳定性良好。利用该方法检测34份临床样品,其检测结果与普通PCR检测结果符合率为100%。本研究建立了一种快速检测布鲁氏菌的方法,该方法不需要特殊的仪器,操作简便,灵敏度高,肉眼即可观察到结果,为布鲁氏菌病的现场快速诊断提供了帮助。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株及主要实验材料
  •   1.2 重组质粒标准品的构建与鉴定
  •   1.3 RP A引物的设计与筛选
  •   1.4 RP A-LFD反应条件的优化
  •   1.5 特异性试验
  •   1.6 敏感性试验
  •   1.7 重复性试验
  •   1.8 临床样品的检测
  • 2 结果
  •   2.1 重组质粒标准品的构建与鉴定结果
  •   2.2 RP A引物筛选结果
  •   2.3 RP A-LFD反应条件优化试验结果
  •   2.4 特异性试验结果
  •   2.5 敏感性试验结果
  •   2.6 重复性试验结果
  •   2.7 临床样品的检测结果
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 于博,李博宇,赵博,李东,李健明,时坤,曾范利,宗颖,杜锐

    关键词: 布鲁氏菌,重组酶聚合酶扩增技术,侧流层析试纸条

    来源: 中国预防兽医学报 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 吉林农业大学动物科学技术学院,吉林农业大学中药材学院

    基金: 国家重点研发计划项目(2018YFD0500900),吉林省科技厅科技支撑计划(20180201010YY)

    分类号: S852.61

    页码: 1233-1237

    总页数: 5

    文件大小: 1406K

    下载量: 134

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/a3ad6a7eca6241e849ad6c36.html