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除草剂异丙甲草胺特异性抗体制备及免疫检测方法的建立

论文摘要

为检测食品中的异丙甲草胺农药残留,降低其对人体可能造成的危害,本文建立了基于抗体的酶联免疫分析方法。首先以除草剂异丙甲草胺、3-巯基丙酸为原料合成半抗原,经由氢核磁共振和质谱方法鉴定后,通过碳二亚胺（EDC）法将半抗原与载体蛋白偶联制备异丙甲草胺人工抗原,免疫新西兰大白兔获取抗体,通过棋盘滴定确定抗原抗体最佳稀释倍数,ELISA反应的抗体稀释液为PBS（1%PEG 6000）,药物稀释液为PBS（10%甲醇）,在此基础上建立间接竞争ELISA标曲,其IC50为14.64 ng/mL,检测限（limit of detection,LOD）为0.8 ng/mL,线性检测范围IC20～IC80为1.51～141.92 ng/mL。与14种结构类似物进行交叉反应,交叉反应率低于3%。向环境水样中添加异丙甲草胺,回收率为86.60%～102.16%,变异系数（RSD）为7.05%～13.30%。此抗体灵敏度高特异性好,可用于食品和环境中异丙甲草胺的监测。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 主要药品与试剂
  •   1.2 主要仪器设备
  •   1.3 实验方法
  •     1.3.1 半抗原合成与鉴定
  •     1.3.2 人工抗原合成与鉴定
  •     1.3.3 抗体制备
  •     1.3.4 ELISA优化
  •     1.3.5 标曲建立
  •     1.3.6 特异性评价
  •     1.3.7 水样添加回收实验
  •     1.3.8 数据统计分析
  • 2 结果和讨论
  •   2.1 半抗原合成
  •   2.2 人工抗原鉴定
  •   2.3 ELISA优化
  •     2.3.1 抗原抗体工作浓度优化
  •     2.3.2 ELISA体系优化
  •   2.4标曲建立
  •   2.5 交叉反应结果分析
  •   2.6 添加回收
  • 3 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 许晶晶,王兰腾,赖玉健,李向梅,雷红涛,沈兴

    关键词: 异丙甲草胺,多克隆抗体,间接竞争酶联免疫吸附

    来源: 现代食品科技 2019年10期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,农业科技

    专业: 轻工业手工业,植物保护

    单位: 华南农业大学食品学院

    基金: 国家自然科学基金青年基金项目(31601555)

    分类号: TS207.53;S481.8

    DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2019.10.033

    页码: 246-252

    总页数: 7

    文件大小: 1466K

    下载量: 151

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/a83a14c81731b9c0543b85ea.html