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CE-LIF方法对重组人促红细胞生成素中N-寡糖的快速分析

论文摘要

目的:建立毛细管电泳-激光诱导荧光检测（CE-LIF）的方法对重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin,rhEPO）的N-寡糖进行快速分析。方法:以N-糖苷酶酶切rhEPO样品,采用磁珠辅助法收集酶切下来的N-寡糖,以APTS对酶切下来的N-寡糖进行荧光标记,利用CE-LIF实现分离检测,通过GU数据库进行糖型鉴定。CE-LIF条件:采用未涂层熔融石英毛细管（有效长度20 cm,总长度30 cm,内径50μm）,电迁移进样,电压设为-2 kV,进样时间2 s;毛细管分离温度设为25℃,毛细管分离电压为-30 kV,分离时间5.5 min;LIF检测器的激发波长及发射波长分别为488 nm和520 nm。结果:新建方法在60 min内完成样品前处理,5 min内完成分离分析检测;FA2BG2S2、FA2（3）G1S1和A2B3个峰的迁移时间的RSD均小于0.2%,校正峰面积百分比RSD均小于2.6%（n=5）。结论:本研究建立的CE-LIF快速糖分析法高效快速,重复性好,可对糖型进行实时鉴定,适用于rhEPO制品的N-寡糖分析。

论文目录

  • 1 仪器与试药
  •   1.1 毛细管电泳系统
  •   1.2 试剂和样品
  • 2 方法与结果
  •   2.1 样品的处理
  •   2.2 rh EPO的N-寡糖毛细管电泳快速分离分析
  •   2.3 精密度试验
  •   2.4 稳定性试验
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李响,于雷,史新昌,周勇,饶春明

    关键词: 促红细胞生成素,糖基化,重组蛋白,数据库

    来源: 药物分析杂志 2019年10期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

    专业: 化学,药学

    单位: 中国食品药品检定研究院

    基金: 国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目(2015ZX09501008-001)

    分类号: R917;O657.3

    DOI: 10.16155/j.0254-1793.2019.10.14

    页码: 1852-1857

    总页数: 6

    文件大小: 1480K

    下载量: 80

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/ae98c9418bfde05f52b23444.html