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莱茵衣藻纤毛内运送蛋白IFT57抗原的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备

论文摘要

IFT57是纤毛内运送蛋白IFT B复合物的一个重要组分,在鞭毛组装中发挥着重要作用。利用莱茵衣藻ift57基因中一段编码亲水性氨基酸序列的片段构建了带有6×His标签的原核表达载体pET-28a（+）-ift57,并转入大肠杆菌BL21（DE3）,通过IPTG诱导表达蛋白质,以12 g/dL SDS-PAGE鉴定,获得相对分子质量大小为17 200的ITF57重组蛋白质片段。对6×His-IFT57融合蛋白质进行纯化,并用其免疫新西兰大白兔,采集第5次免疫后血液并分离血清。利用Western blotting对所获抗体进行特异性鉴定。ELISA测定结果表明,抗血清效价为512 000。在抗血清经Protein A纯化后,Western blotting检测显示所制备的IFT57多克隆抗体能够特异性识别莱茵衣藻中的IFT57蛋白质。这一结果表明,为表达纯化溶解性较差的蛋白质抗体制备提供了借鉴意义,所获抗体为深入研究IFT57在鞭毛组装中的作用机理奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株和质粒
  •     1.1.2 主要试剂
  •     1.1.3 实验动物
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 IFT57蛋白质亲水性分析
  •     1.2.2 原核表达载体构建
  •     1.2.3 重组质粒在大肠杆菌中诱导表达验证
  •     1.2.4 融合蛋白质6×His-IFT57的纯化
  •     1.2.5 多克隆抗体的制备
  •     1.2.6 间接ELISA法测定抗血清效价
  •     1.2.7 抗血清的纯化
  •     1.2.8 Western blotting检测多克隆抗体的特异性
  • 2 结果与分析
  •   2.1 原核表达载体的构建及鉴定
  •   2.2 融合蛋白质的诱导表达及可溶性分析
  •   2.3 融合蛋白质的纯化
  •   2.4 抗血清效价的测定
  •   2.5 Western blotting抗体特性检测
  • 3 结语

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 韩鹏飞,闫珍,樊振川

    关键词: 莱茵衣藻,纤毛,原核表达,多克隆抗体

    来源: 食品与生物技术学报 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 天津科技大学大健康生物技术研究所,天津市大健康生物技术国际联合研究中心,天津科技大学食品工程与生物技术学院

    基金: 国际遗传工程与生物技术中心合作研究项目（CRP,CHN15-01）,天津科技大学大学生实验室创新基金项目（1614A103X）

    分类号: Q949.21

    页码: 108-114

    总页数: 7

    文件大小: 2227K

    下载量: 36

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/b2b58e4ba64a732d62d483d8.html