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链霉菌L10608来源木聚糖酶xyn-GH10/11基因的克隆与生物信息分析

论文摘要

基于菌株L10608所产天然酶水解木聚糖底物时具有良好的水解木聚糖底物特性,通过设计简并引物,经巢式PCR克隆得到L10608菌株木聚糖酶基因全长（xyn-GH10与xyn-GH11）,并对其进行生物信息学分析。由分析可知酶xyn-GH10全长1 469 bp,分子质量:50.677 ku;理论等电点pI:7.98;预测该木聚糖酶的信号肽为MGIQALPRAAVRQKLRTPLPALAAGVLGLTAALVPPTNADA;该木聚糖酶蛋白序列具有明显的第10族糖苷水解酶的八叠桶型保守区域,且能编码一段由108个氨基酸组成的RicinB-lectin非催化结构域。木聚糖酶xynGH11全长729 bp;分子质量:24.003 ku;理论等电点p I:8.98;预测该木聚糖酶的信号肽为MHQDGSQQDRT QNPAPFGGLSRRGFLVGGTGAAALAAGSGLLLPGTAHAA。该木聚糖酶蛋白序列具有明显的第11族糖苷水解酶的"右手半握状"保守区域。xyn-GH10与xyn-GH11基因经原核表达后其中木聚糖酶xyn-GH10酶活为160 U/mL,木聚糖酶xyn-GH11酶活为55 U/mL。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •   1.2 仪器与设备
  •   1.3 培养基
  •   1.4 试验方法
  •     1.4.1 基因组DNA的提取及编码基因保守序列扩增
  •     1.4.2 木聚糖酶基因cDNA的扩增
  •     1.4.3 木聚糖酶基因序列分析
  •     1.4.4 重组质粒p ET28a-xyn-GH10/11连接与转化
  •     1.4.5 重组蛋白表达及酶活力测定
  • 2 结果与分析
  •   2.1 木聚糖酶基因xynA保守序列以及侧翼序列扩增
  •   2.2 木聚糖酶基因序列全长及cDNA序列的获得
  •   2.3 木聚糖酶基因的序列分析
  •   2.4 重组质粒的构建及验证
  •   2.5 重组蛋白IPTG诱导表达
  • 3 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 熊科,熊苏玥,柳佳芸,高思宇,邓蕾,裴鹏钢

    关键词: 链霉菌,木聚糖酶,基因克隆,生物信息学分析

    来源: 中国食品学报 2019年10期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 北京工商大学北京市食品添加剂工程技术研究中心,北京工商大学北京市质量与安全重点实验室,北京工商大学北京市风味化学重点实验室,北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心

    基金: 国家研发计划项目(2017YFC1600605),北京自然科学基金项目(6172003),国家自然科学基金项目(31601408)

    分类号: Q811.4;Q78

    DOI: 10.16429/j.1009-7848.2019.10.007

    页码: 56-67

    总页数: 12

    文件大小: 1057K

    下载量: 143

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/bb2a7570b143b8800415d5ae.html