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抗猪瘟病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定

论文摘要

为了获得具有中和活性的抗猪瘟病毒（CSFV）单克隆抗体,分别将CSFV和杆状病毒表达系统表达纯化的CSFV E2蛋白与佐剂混合后免疫BABL/c小鼠,经杂交瘤细胞融合制备抗CSFV单克隆抗体,经过多轮亚克隆和免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）筛选,成功获得5D1、8H7、9A1和13B2共4株能够稳定分泌抗CSFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。4株单克隆抗体轻链均属于κ型,其中5D1、8H7、13B2为IgG1亚型,9A1为IgG2c亚型。间接ELISA检测结果显示,4株单克隆抗体的腹水效价在2.56×105～1.02×106;IPMA效价分别为6.40×104、1.28×105、2.56×105、1.28×105;SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,4株单克隆抗体均能与经原核表达系统及杆状病毒表达系统获得的CSFV E2蛋白发生特异性反应;IPMA检测结果显示,4株单克隆抗体均能与CSFV发生特异性反应,而与牛流行性腹泻病毒（BVDV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪圆环病毒（PCV2）均无交叉反应。病毒中和试验证实,单克隆抗体13B2具有中和活性,其中和效价为1.28×104。综上,成功筛选出4株能够分泌抗CSFV特异性抗体的杂交瘤细胞株,其中单克隆抗体13B2具有中和CSFV感染活性。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 毒株、E2蛋白及细胞
  •   1.2 供试动物
  •   1.3 抗原制备
  •   1.4 动物免疫
  •   1.5 细胞融合
  •   1.6 免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）
  •   1.7 单克隆抗体腹水的制备及效价测定
  •   1.8 CSFV E2 蛋白单克隆抗体的鉴定
  •   1.9 中和性单克隆抗体的筛选与鉴定
  • 2 结果与分析
  •   2.1 抗原纯化与鉴定
  •   2.2 小鼠抗体效价测定
  •   2.3 抗CSFV E2蛋白单克隆抗体的筛选
  •   2.4 单克隆抗体腹水效价测定
  •   2.5 单克隆抗体的特异性鉴定
  •   2.6 中和性单克隆抗体的筛选与鉴定
  • 3 结论与讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 刘运超,陈玉梅,冯丽丽,汪磊,王聚财,陆东峰,张改平

    关键词: 猪瘟病毒,蛋白,中和性单克隆抗体,抗体中和效价

    来源: 河南农业科学 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 农业科技

    专业: 畜牧与动物医学

    单位: 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点开放实验室,郑州大学生命科学学院,河南省农业科学院农业经济与信息研究所,河南花花牛实业总公司

    基金: 国家重点研发计划项目(2016YFD0500704,2017YFD0501103)

    分类号: S852.4

    DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2019.12.017

    页码: 114-120

    总页数: 7

    文件大小: 2848K

    下载量: 325

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/cef111565b1bb3b746cd6c1d.html