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自噬相关蛋白Atg4.1过表达促进嗜热四膜虫亲本大核程序化降解

论文摘要

细胞核自噬在真核生物进化过程中具有重要作用,然而不同生物中的自噬分子调控机制并不完全清楚。嗜热四膜虫有性生殖过程中亲本大核的程序化降解是一种独特的细胞核选择性自噬。该研究从嗜热四膜虫中鉴定出一种自噬相关基因Tt ATG4.1（TTHERM00526270）,编码677个氨基酸。Tt ATG4.1在营养生长期和饥饿期不表达,在有性生殖期2 h特异表达,亲本大核开始降解的anlagen时期表达量最高。通过同源重组构建获得MTT1启动子调控表达的ATG4.1突变株,免疫荧光定位显示, Atg4.1定位在细胞质和降解的亲本大核上。过量表达Atg4.1导致anlagen时期亲本大核未能正常凝缩,且细胞核膨大。通过自噬体和溶酶体荧光探针标记发现过量表达Atg4.1不影响亲本大核的酸化,但相比于野生型细胞,过表达Atg4.1细胞株中,亲本大核的降解更快。研究表明自噬相关蛋白Atg4.1参与调控嗜热四膜虫有性生殖中亲本大核程序化降解。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 序列分析比对
  •   1.3 嗜热四膜虫细胞株的培养
  •   1.4 实时荧光定量PCR
  •   1.5 重组表达质粒pXS75-ATG4.1的构建
  •   1.6 细胞转化与稳定细胞突变株的筛选
  •   1.7 间接免疫荧光定位
  •   1.8 活细胞荧光探针标记与观察
  •   1.9 统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 ATG4.1的鉴定和序列分析
  •   2.2 Atg4.1在四膜虫有性生殖时期定位于细胞质和程序化降解的亲本大核上
  •   2.3 过表达Atg4.1阻碍亲本大核凝缩降解
  •   2.4 过表达Atg4.1不影响亲本大核的酸化
  •   2.5 过表达Atg4.1不影响Atg8在亲本大核上的定位
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 郑文萍,薄涛,刘亚,许静,王伟

    关键词: 过表达,亲本大核,程序化降解,嗜热四膜虫

    来源: 中国细胞生物学学报 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室,山西大学生命科学学院

    基金: 国家自然科学基金(批准号:31601857,31872224),山西省应用基础研究计划(批准号:201801D221241)资助的课题~~

    分类号: Q75

    页码: 841-850

    总页数: 10

    文件大小: 3371K

    下载量: 97

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/cfaeecfc0d2fa2019513a640.html