Print

敲除PLAC8蛋白对人胚肾细胞增殖的影响

论文摘要

为了构建PLAC8蛋白敲除的人胚肾细胞株（293T）并检测其对293T细胞增殖的影响,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术及流式细胞分选术构建敲除PLAC8蛋白的293T细胞株,通过基因组测序及错配酶酶切进行编辑细胞系的筛选。用筛选得到的细胞系提取细胞总蛋白,通过蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测编辑效率。进一步通过细胞生存实验（MTT实验）检测敲除PLAC8对293T细胞增殖的影响,通过蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测敲除PLAC8蛋白后293T细胞中增殖相关基因的表达水平变化。结果表明,成功构建了PLAC8蛋白敲除的细胞系。与野生型细胞系相比,PLAC8表达下调会抑制细胞增殖,且在这一过程中AKT、RAF-1、ERK2、C-MYC等4个与增殖相关基因的蛋白水平改变,提示PLAC8可能通过AKT及RAF-1-ERK2-C-MYC这一级联通路信号调控细胞增殖。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料和试剂
  •   1.2 sgRNA寡核苷酸链序列及检测引物的设计
  •   1.3 PX458-sgRNA表达载体的构建和鉴定
  •   1.4 细胞培养和细胞转染
  •   1.5 流式细胞仪分选
  •   1.6 单细胞培养
  •   1.7 测序检测
  •   1.8 Western Blot检测编辑效率及蛋白表达
  •   1.9 MTT检测细胞生长速度
  • 2 结果与分析
  •   2.1 敲除PLAC8基因的293T细胞株的构建
  •   2.2 细胞株的鉴定
  •   2.3 PLAC8蛋白表达下调对293T细胞增殖的影响
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 秦绪慧,马立群,欧阳聪,王海霞,浦易之,薛璐

    关键词: 基因敲除,细胞增殖,信号通路

    来源: 生物学杂志 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 中南民族大学生命科学学院医学生物研究所武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室

    基金: 湖北省自然科学基金一般面上项目(No.2018CFB594)

    分类号: R329.2

    页码: 25-29

    总页数: 5

    文件大小: 2356K

    下载量: 77

    相关论文文献

    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/d88912feeb435836936453d5.html