Print

流感病毒NS1蛋白与宿主蛋白DOK6的相互作用研究

论文摘要

A型流感病毒非结构蛋白1 （NS1）是病毒编码的必需蛋白,在病毒复制周期中发挥重要作用。NS1蛋白在病毒侵入宿主后大量表达,抑制宿主干扰素通路的激活,选择性关闭宿主基因的表达且能够增强病毒蛋白的表达。为研究宿主DOK6蛋白与NS1蛋白的相互作用关系,本研究利用重组质粒p CAGGS-V5-DOK6、p CAGGS-Flag-NS1共转染293T细胞,利用免疫共沉淀试验（Co-IP）检测,结果显示沉淀NS1蛋白后能够检测到DOK6蛋白条带,表明DOK6蛋白与NS1蛋白存在相互作用;将二者共转染A549细胞后利用激光共聚焦显微镜观察,发现二者在细胞质中存在共定位,表明两种蛋白在细胞质中发生相互作用。通过双分子荧光互补试验（BiFC）检测,结果显示NS1蛋白能够与DOK6蛋白的磷酸化酪氨酸结合结构域（Phosphotyrosine binding domain,PTB）结合从而发出较强荧光,表明NS1蛋白能够与DOK6蛋白（PTB）结构域发生相互作用。本研究进一步完善了A型流感病毒NS1蛋白参与的复杂分子间相互作用网络,为深入理解流感病毒在宿主体内复制的分子调控机制奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 细胞系、质粒和病毒
  •   1.2抗体及主要试剂
  •   1.3 重组质粒的构建与鉴定
  •   1.4 DOK6与NS1相互作用的免疫共沉淀（Co-IP）试验
  •   1.5 DOK6与NS1相互作用的的激光共聚焦试验
  •   1.6 DOK6与NS1相互作用的双分子荧光互补试验（BiFC）
  • 2 结果
  •   2.1 重组质粒的鉴定结果
  •   2.2 DOK6与NS1相互作用的Co-IP验证结果将
  •   2.3 NS1与DOK6细胞内共定位的验证结果
  •   2.4 NS1与DOK6相互作用的Bi FC验证
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 黄山雨,梁立滨,李俊平,王倩,赵青青,周陈陈,赵玉辉,王广文,李奇兵,孔凡迪,李呈军,陈化兰,姜丽

    关键词: 流感病毒,蛋白,蛋白相互作用

    来源: 中国预防兽医学报 2019年10期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

    基金: 国家自然科学基金(31402206,31672582)

    分类号: S852.65

    页码: 987-992

    总页数: 6

    文件大小: 2114K

    下载量: 234

    相关论文文献

    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/dd92383d35b80c5e4d1264aa.html