张艳华, 赵彦禹, 彭建新, 洪华珠[1]2005年在《芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA片段的克隆与鉴定》文中提出实验提取芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA,5种限制性内切酶消化,并对EcoRⅠ酶切片段进行分子克隆.结果表明,芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株分子量为113.78 kb;实验成功克隆出10个病毒DNAEcoRⅠ酶切片段.上述结果为芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株的分子生物学分析提供了基础材料.
张艳华[2]2003年在《芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA片段的克隆》文中认为本论文的主要内容是关于芹菜夜蛾核型多角体病毒(Syngrapha Falcifera Multiple Nuclear Polyhedrosis Virus，SfaMNPV)D克隆株基因组的限制性内切酶图谱分析和按鸟枪法(shotgun approach)用质粒pUC18作载体，对EcoRⅠ完全酶切片段进行的分子克隆，并且随机的抽取克隆片段H进行了序列测定和分析。 酚-氯仿-异戊醇法体取SfaMNPV-D克隆株基因组DNA，用EcoRⅠ、HindⅢ、PstⅠ、BamHⅠ 4种限制性内切酶酶解消化，以Lambda噬菌体DNA经EcoRⅠ／HindⅢ酶解所得各片段作为分子量标准，以片段的迁移距离为横坐标，以各个片段的大小(Kb)的常用对数值为纵坐标作标准曲线，根据酶切片段的迁移距离从标准曲线上求出各个片段的大小，由此计算出病毒基因组相对分子量为113.12Kb． 病毒基因组经限制性内切酶EcoRⅠ酶解，酶解片段不经过凝胶电泳分部分离，直接与pUC18载体在体外进行连接，pUC18载体经CIP处理，连接后的产物转化大肠杆菌DH-5α感受态细胞，以氨卞抗性和α-互补为筛选标记挑取重组菌落，提取质粒DNA后，酶切分析鉴定克隆片段，证明获得了10个插入了病毒DNA片段的重组质粒。 随机的抽取重组病毒DNA片段H序列测定，序列分析结果显示：H片段含有基因vp1054和lef-10的部分同源序列，但基因不完整，目前测序和序列工作仍在进行。
参考文献：
[1]. 芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA片段的克隆与鉴定[J]. 张艳华, 赵彦禹, 彭建新, 洪华珠. 徐州师范大学学报(自然科学版). 2005
[2]. 芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA片段的克隆[D]. 张艳华. 华中师范大学. 2003
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