D-甘露糖异构酶的克隆表达及酶法制备D-甘露糖
论文摘要
将大肠杆菌BL21中的D-甘露糖异构酶(MIase)基因yihS克隆到表达载体pET-28a(+)中,并转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中表达。重组菌株经IPTG诱导培养6 h后MIase发酵酶活可达4.2 U/mL。重组MIase生产D-甘露糖时不需要金属离子的参与。该酶在40℃和pH 7.5条件下表现出催化D-果糖的最高活性,转化率为25%左右;通过研究底物浓度对酶活性的影响,得出该酶的活性不受底物浓度的抑制,以D-果糖为底物时,动力学参数Km为123.32mmol/L,Vmax为113.64μmol/(min·mg),催化效率kcat/Km为0.691 (s·mmol/L)。
论文目录
1 材料与方法 1.1 菌株与质粒 1.2 重组MIase的克隆及表达 1.3 发酵培养 1.4 MIase的分离纯化 1.5 MIase酶学性质研究 1.5.1 温度对酶活及热稳定性的影响 1.5.2 pH对酶活及热稳定性的影响 1.5.3 不同金属离子对酶活的影响 1.6 MIase酶活定义2 结果与讨论 2.1 重组质粒p ET-28a (+) -yihS的构建 2.2 MIase的表达及分离纯化结果 2.3 最佳酶转化反应的条件 2.3.1 MIase的最适温度及温度稳定性 2.3.2 pH对MIase酶活及稳定性的影响 2.3.3 不同金属离子对MIase酶活的影响 2.3.4 D-甘露糖的酶法制备 2.3.5 MIase的反应动力学参数3 结语
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 胡兴,张涛,沐万孟,缪铭,江波
关键词: 甘露糖,甘露糖异构酶,表达,生物制备
来源: 食品与生物技术学报 2019年04期
年度: 2019
分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学
专业: 生物学
单位: 食品科学与技术国家重点实验室江南大学,江南大学食品学院
基金: 国家863计划项目(2013AA102102),国家自然科学基金项目(31230057)
分类号: Q53;Q78
页码: 58-63
总页数: 6
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本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/fbadb09e9f44b4402849c2a0.html