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NOD8抑制人胰腺癌细胞自噬及凋亡对其自噬作用的影响

论文摘要

目的:探讨NOD8（也称NLRP10或PYNOD）是否能抑制胰腺癌细胞发生自噬及其可能机制,并研究凋亡对NOD8调控自噬的影响。方法:用JetPRIME阳离子聚合物将空质粒pEGFP-C2和重组质粒pEGFP-NOD8分别转染入胰腺癌Panc-1细胞,并设立空白对照组,48 h后应用Western blot检测NOD8蛋白、自噬相关蛋白（beclin-1和LC3-Ⅱ）以及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关蛋白（Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR）的表达;并采用免疫荧光染色法观察细胞LC3斑点的数量。此外,用caspase抑制剂Z-VAD-FMK作用于过表达NOD8的Panc-1细胞后,Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达水平;免疫荧光染色法观察细胞LC3斑点数量。结果:pEGFP-NOD8组细胞NOD8蛋白表达明显高于对照组和pEGFP-C2组（P<0.01）。与对照组和pEGFP-C2组相比,pEGFP-NOD8组细胞beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达及细胞LC3斑点数量显著降低;并且pEGFP-NOD8组细胞p-Akt及p-mTOR蛋白表达量显著上升（P<0.01）,而AKT和mTOR蛋白表达无明显差异。与pEGFP-NOD8组相比,pEGFP-NOD8+Z-VAD-FMK组细胞beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平及LC3斑点数量显著高于pEGFP-NOD8组。结论:NOD8可抑制Panc-1细胞自噬,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR通路有关;凋亡可增强NOD8对自噬的抑制作用。

论文目录

  • 材 料 和 方 法
  •   1 材料
  •   2 方法
  •     2.1 细胞培养及质粒转染
  •     2.2 Western blot检测相关蛋白表达
  •     2.3 免疫荧光法检测细胞LC3斑点形成
  •   3 统计学处理
  • 结 果
  •   1 重组质粒转染前后NOD8蛋白的表达
  •   2 NOD8对LC3-Ⅱ和beclin-1蛋白表达的影响
  •   3 免疫荧光染色法检测细胞LC3斑点形成
  •   4 NOD8对PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达的影响
  •   5 Z-VAD-FMK对NOD8抑制细胞自噬的影响
  •     5.1 Z-VAD-FMK增加过表达NOD8细胞LC3-Ⅱ和beclin-1蛋白水平
  •     5.2 Z-VAD-FMK增加过表达NOD8细胞LC3斑点形成
  • 讨 论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 梁若龙,曾琪,王晗月,胡巢凤,罗森

    关键词: 蛋白,自噬,细胞凋亡,胰腺癌,信号通路

    来源: 中国病理生理杂志 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 肿瘤学

    单位: 暨南大学基础医学院病理生理学系国家中医药管理局病理生理学实验室,赣南医学院第一附属医院

    基金: 广东省自然科学基金资助项目(No.S2012010008161)

    分类号: R735.9

    页码: 2215-2220

    总页数: 6

    文件大小: 4311K

    下载量: 137

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/fd87873eb00ad39fe172b5a2.html