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靶向马铃薯StProDH1基因的CRISPR/Cas9 sgRNA表达载体构建

论文摘要

CRISPR/Cas9基因编辑系统已成为许多作物基因功能研究和品种改良的重要工具。脯氨酸（Pro）在植物响应干旱胁迫方面起着重要作用,脯氨酸脱氢酶ProDH是脯氨酸分解途径中的限速酶。为了研究StProDH1在马铃薯脯氨酸代谢中的作用,本研究以StProDH1为靶基因,构建了表达马铃薯脯氨酸脱氢酶g RNA的CRISPR/Cas9基因敲除系统,在StProDH1基因5’端第一个外显子上为靶标区域选择设计sgRNA,以p P1C.4为模板,克隆得到sgRNA克隆框,将得到的sgRNA克隆框通过同源重组技术连接到pP1C.4载体中,获得pP1C.4-Cas9-ProDH1-g RNA载体。通过设计引物特异性扩增以及测序进一步确定sgRNA准确地连入载体,这对马铃薯中脯氨酸累积及其培育抗旱马铃薯新品种具有重要意义。

论文目录

  • 1 结果与分析
  •   1.1 设计和克隆获得sgRNA克隆框
  •   1.2 筛选阳性克隆及测序
  • 2 讨论
  • 3 材料与方法
  •   3.1 试验材料
  •   3.2 gRNA引物设计
  •   3.3 PCR扩增sgRNA克隆框
  •   3.4 目的片段的制备
  •   3.5 重组酶整合及转化
  •   3.6 PCR检测及测序
  • 作者贡献

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李世贵,杨江伟,朱熙,王树林,张宁,司怀军

    关键词: 基因编辑系统,马铃薯,载体构建

    来源: 分子植物育种 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,农作物

    单位: 甘肃农业大学生命科学技术学院,甘肃农业大学甘肃省干旱生境作物学省部共建国家重点试验室培育基地甘肃省作物遗传改良与种质创新重点试验室

    基金: 国家自然科学基金(31660416,31460370),甘肃农业大学“伏羲人才”计划项目(FXRC20130102)共同资助

    分类号: S532;Q943.2

    DOI: 10.13271/j.mpb.017.000841

    页码: 841-845

    总页数: 5

    文件大小: 1209K

    下载量: 635

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    本文来源: https://www.lunwen66.cn/article/fdbefefb98f08a25875c963e.html